科研产出
降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1角蛋白酶纯化及酶学性质研究
《西南农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda.结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30~40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH7.0 ~9.5的范围内具有较好的稳定性.金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2、Fe3+能完全抑制酶活;1%巯基乙醇对酶具有明显激活作用.EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶.
全文链接
请求原文
虹鳟Ⅰ型干扰素基因的表达与纯化
《动物医学进展 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为了获得能用于抗虹鳟(Rainbow trout,学名,Oncorhynchus mykiss)病毒性疾病生物制剂开发的高纯度Ⅰ型干扰素(rtIFN3)蛋白,克隆了虹鳟rtIFN3,构建了pET21a-rtIFN3/BL21(DE3)原核表达与发酵系,并对rtIFN3进行了表达。重组的rtIFN3分子质量约18.5ku,以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白量的16%。随后,提取2L发酵瓶的包涵体蛋白,经变性与复性后,再经分子筛和阴离子交换层析进行纯化。纯化后,rtIFN3SDS-PAGE电泳结果表明蛋白纯度达98%,复性率为3%。本研究获得的高纯度复性蛋白为生物制剂的研制提供了材料。
关键词： 虹鳟干扰素(rtIFN) 表达 发酵 纯化
全文链接
请求原文
重组鸡Cathelicidins类抗菌肽的融合表达及其对金黄色葡萄球菌抗菌活性的研究
《中国畜牧兽医 》 2013 北大核心
摘要：Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子质量分别为7、8、7.5ku。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcusluteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13(Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌及绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。以雏鸡为实验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,结果表明,注射中、高剂量CathL-1抗菌肽试验组(5、10mg/kg),在试验结束后取肝脏组织匀浆液涂布于TMP平板,未分离到葡萄球菌。各抗菌肽试验组平均增重均高于感染对照组,其中低剂量抗菌肽试验组(2.5mg/kg)体内抑菌效果虽与普通抗生素相当,但其增重效果尤为明显。
关键词： 抗菌肽 Cathelicidins 融合表达 纯化 抑菌活性 金黄色葡萄球菌
全文链接
请求原文
蓝莓多酚的提取及功效的研究进展
《中国食物与营养 》 2013
摘要：多酚具有多重功效,逐渐引起了人们的重视。按照多酚的结合方式可分为可萃取多酚(EPP)和不可萃取多酚(NEPP),本文从提取、功效两个方面综述了国内外对蓝莓中EPP和NEPP的研究概况。
全文链接
请求原文
鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定
《家禽科学 》 2013
摘要：防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主—家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素。鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景。通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa。对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例。表达上清用Ni2+-NTA Sepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带。琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有明显的抑制活性。Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础。
关键词： 抗菌肽 β-防御素-1(Gal-1) 融合表达 分离纯化 亲和层析 抑菌活性
全文链接
请求原文
超滤膜分离纯化花生壳中水溶性膳食纤维
《农业工程学报 》 2012 EI 北大核心 CSCD
摘要：为探索花生壳中水溶性膳食纤维(SDF)的有效分离纯化方法和效果,选择适宜的膜组件,采用不同截留分子量的超滤膜以及优化膜分离过程的操作条件,对SDF提取液进行超滤分离,试验结果表明:选用PS-30聚砜膜,在压力为0.08MPa、料液比为1:75g/mL、温度为30℃时,分离纯化效果最为显著。其中,膜通量达到127.2L/(m2·h)、SDF的得率达到67.56%,非淀粉多糖(NSP)的质量分数由49.85%提高到92.36%,蛋白质量分数从5.53%降到0.92%。与传统的提取法比较,超滤膜分离纯化花生壳水溶性膳食纤维具有生产周期短,成本低,产品纯度高等优点。
关键词： 分离 纯化 膜 优化 过滤 花生壳 水溶性膳食纤维
全文链接
请求原文
