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鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定

文献类型： 中文期刊

作者： 吴静 1 ; 史玉颖 1 ; 李玉峰 1 ; 马秀丽 1 ; 黄兵 1 ; 宋敏训 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院家禽研究所

关键词： 抗菌肽;β-防御素-1(Gal-1);融合表达;分离纯化;亲和层析;抑菌活性

期刊名称： 家禽科学

ISSN： 1673-1085

年卷期： 2013 年 01 期

页码： 8-13

摘要： 防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主—家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素。鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景。通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa。对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例。表达上清用Ni2+-NTA Sepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带。琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有明显的抑制活性。Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础。

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