科研产出
产壳聚糖酶菌株ncps116发酵条件优化及其酶学性质
《化工进展 》 2018 EI 北大核心 CSCD
摘要：通过形态学观察、生理生化实验及16S r DNA序列分析鉴定产壳聚糖酶菌株ncps116为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。通过单因素和正交实验对该菌株发酵产酶条件进行了优化。结果表明其最适产酶条件为:粉末壳聚糖15g/L,硫酸铵30g/L,初始p H 6.0,温度32℃,发酵时间72h,500m L三角瓶装液量120m L,接种量4%,在此条件下该菌株产壳聚糖酶活力达43.89U/m L。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析对菌株发酵液中的壳聚糖酶进行了纯化,并对其酶学性质进行了初步研究。结果表明,壳聚糖酶经SDS-PAGE分析,其分子量为4.37万。该酶酶促反应最适p H和最适反应温度分别为5.6和50℃,在低于40℃、p H 3.6~5.6范围内较为稳定,5mmol/L的Mn~(2+)对该酶酶活力有明显的增强作用,Cu~(2+)、Ni~(2+)、Fe~(3+)、Ag~+对该酶酶活力有不同程度的抑制作用。壳聚糖酶酶促反应的米氏常数(K_m)为11.10mg/m L,最大反应速率(V_(max))为1.38μmol/(min·m L),对底物表现出较强的专一性。此外,该酶能够抑制黑曲霉(Aspergillus niger)菌丝的生长。
关键词： 壳聚糖酶 发酵条件优化 分离纯化 酶学性质 蜡状芽孢杆菌
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柿饼污染霉菌的分离鉴定及生物学特性研究
《山东农业科学 》 2018
摘要：为控制柿饼霉变,以发霉的小萼子柿饼为原料,对其中霉菌进行分离纯化,并对主要霉菌进行鉴定和生物学特性研究。结果表明,从发霉柿饼中分离得到两株优势菌S1和S2,通过形态学和分子生物学鉴定,S1为产黄青霉,S2为黑曲霉;菌株S1产黄青霉的最适生长条件为:温度25℃,湿度大于70%,pH 5~7,热致死温度和时间为65℃、5 min或70℃、1 min;菌株S2黑曲霉的最适生长条件为:温度30℃,湿度大于70%,pH5,热致死温度和时间为65℃、15 min或70℃、1 min。
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株。通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%。本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考。
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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金针菇多糖制备过程中体外抗氧化活性研究
《食品研究与开发 》 2018 北大核心
摘要：采用热水浸提、乙醇沉淀、Sevage法除蛋白的方法对金针菇多糖进行提取及纯化,依次得到不同纯度的粗多糖,分别为金针菇多糖1(Flammulina velutipes polysaccharide1,FVP1)、金针菇多糖2(Flammulina velutipes polysaccharide2,FVP2)、金针菇多糖3(Flammulina velutipes polysaccharide3,FVP3),研究纯化过程中金针菇多糖的含量及抗氧化活性变化。采用苯酚硫酸法和3,5-二硝基水杨酸法(3,5-dinitrosalicylic acid,DNS)分别测定提取物中的总糖及还原糖含量,以总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力及抑制羟基自由基能力为检测指标,对纯化过程中金针菇粗多糖的抗氧化能力进行评价。结果表明:FVP1、FVP2、FVP3中多糖的含量分别为10.35%、19.48%、55.21%;得率分别为54.9%、9.26%、1.52%。以上3种不同纯度金针菇粗多糖在0.5 mg/mL~2.0 mg/mL的浓度范围内抗氧化活性能力大小依次为:抑制羟基自由基能力>清除DPPH自由基能力>总抗氧化能力。FVP1、FVP2、FVP3抗氧化能力均随着浓度升高而增强,抗氧化能力的大小依次为FVP1>FVP2>FVP3,这表明分离纯化工艺有降低金针菇多糖体外抗氧化能力的趋势。
关键词： 金针菇多糖 分离纯化 总抗氧化能力 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼 抑制羟基自由基能力
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银杏花粉黄酮组分分离纯化及其清除DPPH自由基能力
《农业工程学报 》 2018 EI 北大核心 CSCD
摘要：为了分离纯化银杏花粉中具有潜在抗氧化活性的黄酮组分及研究其潜在抗氧化活性,该文对银杏花粉的总黄酮进行提取和分步萃取,采用1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl(DPPH)自由基清除率检测和组分分析锁定待纯化萃取相。通过DPPH-HPLC-PAD技术筛选目标清除自由基组分,并采用制备型液相色谱技术分离纯化这些组分,然后采用紫外可见吸收光谱、质谱、核磁共振氢谱、碳谱等技术进行结构鉴定,最后通过测定DPPH自由基清除率初步研究其潜在抗氧化活性。结果显示,银杏花粉粗提物具有清除DPPH自由基活性,对DPPH的半抑制率(IC50值)为1.32 mg/m L,乙酸乙酯相和正丁醇相的IC50值为0.46、0.84 mg/m L,分别是粗提物的34.85%和63.64%。可见,乙酸乙酯相的清除DPPH活性最高。进一步研究显示,乙酸乙酯相富集了6种主要银杏花粉黄酮,而且均具有清除DPPH活性。经纯化和结构鉴定分别为山奈酚-3,4’-双-O-β-D-葡萄糖苷(1)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷(2)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷(3)、山奈酚-3-O-α-L-鼠李糖苷(4)、柚皮素(5)和山奈酚(6)。其清除DPPH自由基的活性由高到低依次为:化合物6>化合物2>化合物3>化合物4>化合物1>化合物5。其中山奈酚清除DPPH的IC50值为0.017 mg/m L,与维生素C及芦丁相比没有显著性差异(P>0.05)。上述研究为银杏花粉功能成分的深入研究奠定了基础。
关键词： 纯化 农产品 加工 银杏花粉 黄酮 DPPH自由基 抗氧化
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山东省副猪嗜血杆菌分子流行病学调查及其外膜蛋白P2基因的表达纯化
《中国动物传染病学报 》 2018 北大核心
摘要：根据副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白(outer membrane proteins,Omp)P2基因序列(GenBank登录号:FJ685754.1)设计引物,对2015～2016年在山东省不同地区采集的225份病料进行PCR扩增和遗传演化分析,结果发现2015年和2016年Hps检出阳性率分别为7.63%、7.48%,细菌分离确定225份样品中17份为阳性;Hps菌株之间的氨基酸同源性在86.7%～99.7%,同源性较高的蛋白具有交叉反应性。构建Hps omp P2基因原核表达载体,确定OmpP2蛋白的最佳诱导温度,通过亲和层析Ni-IDA树脂纯化,获得高纯度的OmpP2蛋白,Western blot确定纯化的OmpP2蛋白与不同血清型的Hps阳性血清均存在良好的反应原性。本研究为进一步探索Hps OmpP2的生物学特性及对副猪嗜血杆菌病的血清学诊断、亚单位疫苗的开发奠定了基础。
关键词： 副猪嗜血杆菌 流行病学 ompP2基因 表达 纯化
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超声波辅助提取金针菇、香菇菇柄中氨基酸的研究
《中国调味品 》 2018 北大核心
摘要：采用超声波辅助提取金针菇、香菇菇柄中的游离氨基酸,研究了超声功率、料液比、超声时间等单因素对提取游离氨基酸的影响,通过正交实验研究了超声波辅助提取的最佳条件。结果表明,各因素对提取金针菇菇柄中游离氨基酸的影响大小依次为料液比>超声时间>超声功率,最佳提取条件为超声功率350 W、料液比1∶20、超声时间3min,在此条件下提取金针菇菇柄中游离氨基酸含量为7.42mg/g;对提取香菇菇柄中游离氨基酸的影响大小依次为料液比>超声功率>超声时间。最佳提取条件为超声功率450W、料液比1∶40、超声时间3min,在此条件下提取香菇菇柄中游离氨基酸含量为4.15mg/g。
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014-2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率.结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株.通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%.本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考.
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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