科研产出
羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒感染PK-15细胞活性和机制探究
《山东农业科学 》 2024
摘要：研究羊栖菜多糖抗A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）感染PK-15细胞的活性及机制。首先采用水提法提取羊栖菜粗多糖，然后用不同孔径超滤膜将粗多糖分为不同分子量段；通过荧光定量PCR测定不同分子量粗多糖抗SVA活性，采用水提醇沉法将抗SVA活性最高分子量段的粗多糖进行纯化并测定其细胞毒性及抗SVA活性；通过在SVA感染周期不同阶段给药研究纯化多糖的抗SVA机制。结果表明，分子量越大的粗多糖抗SVA活性越强；多糖浓度和SVA浓度均与抗SVA活性呈现量效关系，纯化后的多糖对SVA（MOI=0.1）感染PK-15细胞的治疗指数为412,1 mg/mL的多糖对SVA(MOI=10-1～10~4)感染PK-15细胞病毒载量的抑制率在90%～99.999%之间；不同给药时间试验结果表明，多糖能在SVA吸附或穿入细胞以及病毒复制过程发挥抗病毒作用，其中抑制SVA吸附或穿入的活性最强。本研究分离纯化得到的羊栖菜多糖有很强的抗SVA活性，可为后续抗SVA药物的研发提供参考。
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鸡呼肠孤病毒基因Ⅰ型变异株的分离鉴定和致病性分析
《中国兽医杂志 》 2024 北大核心
摘要：为探究导致山东省某肉种鸡场种鸡出现腿病的病原并进行致病性分析，本试验从该肉种鸡场收集病料，进行鸡胚分离、细胞传代、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、序列分析、商品肉鸡的致病性试验和免疫攻毒保护试验。结果显示，分离获得1株鸡呼肠孤病毒(ARV),命名为ARV-LL-2020,该病毒对鸡胚的致死率为100%,在鸡肝癌细胞系(LMH)上具有较强的适应性。ARV-LL-2020毒株与经典的S1133疫苗株同属基因Ⅰ型，但两者的主要抗原σC基因的核苷酸同源性为73.6%,氨基酸同源性为59.1%。ARV-LL-2020毒株回归商品肉鸡能复制出与实际生产中完全一致的发病症状。S1133株商品化弱毒活疫苗对ARV-LL-2020毒株的保护率仅有50%。结果表明，导致种鸡腿病的ARV-LL-2020毒株是1株ARV基因I型变异株，目前S1133株商品化弱毒活疫苗无法对其提供完全保护。
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三株新型鸭源微RNA病毒分离毒株的全基因组序列分析
《畜牧兽医学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：分离新型鸭源微RNA病毒进行全基因组测序并进行遗传进化分析。对本实验室2021年不同来源的种鸭和肉鸭病料进行PCR检测，初步确定存在一种未知分类的新型微RNA病毒感染。取病死鸭病料组织处理后接种SPF鸡胚分离病毒，设计引物对分离到的病毒进行PCR检测，通过重叠PCR方法进行全基因组扩增测序。将分离病毒各蛋白氨基酸序列两两比对，同时选取GenBank数据库中微RNA病毒代表毒株序列绘制系统进化树，并对主要蛋白P1、2C、3D序列比对分析。结果显示：共分离到三株微RNA病毒，分别命名为21101株、21016株和21075株(GenBank登录号：OQ927377～OQ927379)。基因组长度分别为7 445、7 445和7 447 bp,均包含一个编码2 141个氨基酸的开放阅读框(ORF),可划分为P1、P2、P3三个部分，符合微RNA病毒序列特征。基于全基因组序列遗传进化分析发现，三株分离病毒与本实验室前期分离的Duck/FC22/China/2017(GenBank登录号：MN102111)毒株及上海兽医研究所分离的Duck/AH15/CHN/2015(GenBank登录号：MT681985)位于同一分支，与鸭甲型肝炎病毒(Duck hepatitis A virus, DHAV)遗传距离最近。分离的三株鸭源微RNA病毒进行全基因组测序及遗传进化分析发现，与目前已知的两株微RNA毒株为同一类新型鸭源微RNA病毒。
关键词： 新型微RNA病毒 分离鉴定 基因组测序 遗传进化分析
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一株鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析
《家禽科学 》 2024
摘要：为确认山东省德州市某肉鸭场疑似为鸭多杀性巴氏杆菌感染的病原菌，本试验对于送检病死鸭进行剖检、细菌分离培养、菌落观察、生化试验、PCR鉴定、16Sr RNA基因测序分析以及药敏试验等方法鉴定该病原菌。结果显示：分离得到的病原菌在含有5%胎牛血清的营养琼脂培养基中呈现为圆形、湿润、光滑的灰白色菌落，革兰氏染色为阴性短杆菌，瑞氏染色呈现两极浓染；分离菌株的生化特性可以发酵葡萄糖、蔗糖以及甘露醇，硫化氢、氧化酶等试验阳性；细菌特异性PCR扩增片段与预期条带大小一致；16S rRNA基因序列系统进化树显示与多杀性巴氏杆菌同源性为99%；分离菌株对于新霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻肟、林可霉素具有耐药性，对于氟苯尼考、恩诺沙星、多西环素、粘杆菌素B、卡那霉素、大观霉素敏感。本研究结果为鸭源多杀性巴氏杆菌病的防治提供一定参考依据。
关键词： 鸭 多杀性巴氏杆菌 分离鉴定 16S rRNA 耐药性
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2020-2023年山东地区13株3型鸭甲型肝炎病毒的分离鉴定及VP1基因序列分析
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为研究2020—2023年山东地区3型鸭甲型肝炎病毒的流行变异情况，试验采集了山东地区13份疑似鸭肝炎病毒感染的病料，通过病毒分离、RT-PCR扩增鉴定，并进行VP1基因测序及遗传变异分析。结果显示：共分离到13株3型鸭甲型肝炎病毒，均属于GⅠa分支，且分属于GⅠa分支不同小分支，其中2020年分离株（20148、20149）与2021年商品肉鸭分离株（SP21042）核苷酸相似性在98.8%～100%;2023年商品鸭分离株（SP23012、SP23014、SP-2、SP-3、SP23009）核苷酸相似性在99.7%～100%;2021年种鸭分离株（21083）与2022年、2023年种鸭分离株（22443、22468、BL23028）、2023年商品鸭分离株（SP23010）核苷酸相似性在98.8%～99.4%，小分支内相似性均高于98.8%，不同小分支间相似性在96.9%～98.2%;2023年部分3型DHAV分离株VP1基因出现了个别氨基酸位点的突变。研究表明，山东地区分离的13株GⅠa分支鸭甲型肝炎病毒VP1基因出现了变异，需要加以关注。
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一株肉种鸡源鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及致病性研究
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为探究鸭疫里默氏杆菌对鸡的致病力,试验采集疑似感染鸭疫里默氏杆菌的病死肉种鸡肝脏进行病原的分离培养与纯化、革兰氏染色、生化试验、血清型鉴定、16S rRNA基因测序分析及药敏试验,并将分离菌株在SPF鸡、樱桃谷鸭上进行致病性试验.结果显示:分离到1株血清1型鸭疫里默氏杆菌,该菌株与鸭源、鸡源、鹅源鸭疫里默氏杆菌的相似性分别为99.24%~99.47%、99.16%~99.31%、99.04%~99.20%;该分离株对恩诺沙星、卡那霉素、头孢噻肟、多黏菌素B和多西环素较为敏感,对SPF鸡致病性较弱,可引起一过性精神沉郁和泡沫粪,对樱桃谷鸭有较强的致病性,可引起死亡和严重的纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎.研究表明分离的肉种鸡源RA对鸡致病力相对较弱,结果为临床鸡群感染RA的诊断与防控提供参考.
关键词： 肉种鸡 血清1型鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定 致病性
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鲜食口感番茄新品种筛选试验
《长江蔬菜 》 2023
摘要：为筛选出适宜山东寿光地区种植的高产、优质鲜食口感番茄品种,以10个新引进的番茄品种为试验材料,以普罗旺斯为对照,进行对株高、坐果性状、一二穗间叶数,单果质量、硬度、糖度、可溶性固形物含量、产量等方面的比较.试验结果表明,表现较好的品种为19739,综合评价排名高于其他品种,主要表现为植株生长快,果实性状和品质优良,能够满足山东地区的生产要求和消费需求,适合在山东地区推广.
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猪流行性腹泻病毒变异株分离鉴定及攻毒模型建立
《生物学杂志 》 2023 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种急性高度接触性肠道传染病。研究成功分离到一株PEDV,命名为PEDV-20200946。对该毒株的S基因进行测序分析，遗传进化树结果显示，该分离毒株属于G2亚群。通过Reed-Muench法测定该毒株毒价为106.1 TCID50/mL。通过动物回归试验进一步探究该分离毒株对仔猪的致病情况，将12头20日龄仔猪平均分为3组，分别为口服攻毒组、口服+肌注攻毒组和对照组。攻毒后观察临床症状，72 h后采集各组的粪便及发病猪的肠道进行RT-PCR检测和免疫组化分析。结果显示，口服+肌注组仔猪发病最快，口服攻毒组次之，对照未发病。剖检攻毒组仔猪可见其肠壁变薄、肠道膨胀，内含大量黄色液体。免疫组化试验显示，攻毒组猪小肠内可检测到大量PEDV阳性信号，而对照组未检测到。研究建立了PEDV-20200946毒株仔猪攻毒模型，为深入研究PEDV流行毒株的分子特性以及弱毒疫苗的开发奠定基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 流行毒株 分离鉴定 攻毒模型 遗传进化树
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