科研产出
鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定
《中国动物传染病学报 》 2023 北大核心
摘要：近几年，鹅“白点病”频发。本研究从江苏沛县地区肝脏有坏死点的发病鹅中收集肝脏病料，进行病毒分离，通过RT-PCR检测、序列分析进行病毒鉴定，并回归雏鹅进行致病性试验。结果发现：该毒株在鹅胚上生长良好；回归鹅能完全复制出临床中肝脏出现坏死点的病变，并能从实验鹅中重新分离到该病毒；对其主要抗原基因σC进行测序比对和进化树分析发现，其与番鸭呼肠孤病毒基因序列的进化关系较近，同源性为89.6～98.9%。本研究证实了鹅“白点病”的病原为番鸭呼肠孤病毒，为该病的防控奠定了基础。
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贝莱斯芽孢杆菌ZHX-7的分离鉴定及抑菌促生效果
《生物技术通报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为获得高效拮抗花生病害的生防微生物，以花生冠腐病菌为指示菌，采用稀释涂布平板法和平板对峙法，从山东莱西采集的花生连作田的病、健株根际土壤样品中筛选到1株高效生防菌株，编号为ZHX-7。结合形态学特征和16S rDNA、gyrB序列分析，确定ZHX-7为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）。ZHX-7的菌悬液、无菌发酵液和挥发性气体对花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌菌丝生长的抑制均达到极显著的水平，平板对峙试验表明ZHX-7的菌悬液对花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌的抑菌率分别为64.40%、70.37%、77.43%和65.32%。在以ZHX-7无菌发酵液稀释10倍的PDA培养基上，花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌菌丝的生长抑制率分别为67.81%、52.16%、23.52%和69.93%。双皿对扣试验表明ZHX-7的挥发性气体对花生白绢病菌、基腐病菌、网斑病菌和轮斑病菌的抑菌率分别为86.82%、35.40%、81.70%和44.19%。ZHX-7可产生蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶等次级代谢产物；此外，在温室盆栽条件下，ZHX-7有菌发酵液明显促进了花生的生长，同对照相比，鲜质量、干质量分别增加31.24%和26.47%，并且ZHX-7有菌发酵液明显提高了花生对白绢病的抗性，防效达到51.76%。综上所述，本研究筛选获得的一株贝莱斯芽孢杆菌ZHX-7，能够抑制多种花生病原真菌，同时促进花生生长，是一株具有宽广拮抗谱的多功能菌株，具有较好的生防应用潜力。
关键词： 贝莱斯芽孢杆菌 花生病害 分离鉴定 抑菌率 生物防治 促生作用 白绢病菌
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两株坦布苏病毒的分离鉴定及全基因组序列分析
《中国动物传染病学报 》 2023 北大核心
摘要：2019年，从山东某地疑似坦布苏病毒（TMUV）感染的发病鸭和发病鹅组织病料中进行病毒分离，并通过RT-PCR、间接免疫荧光试验以及基因序列分析，确定分离到1株鸭源和1株鹅源TMUV，并命名为BZ0162和WS12101。将分离株全基因组进行PCR分段扩增、测序，发现BZ0162和WS12101基因组全长包含10 991个核苷酸。全基因组核苷酸同源性比较结果显示，BZ0162和WS12101之间同源性是99.5%，与其他TMUV参考毒株同源性均大于95.7%。E蛋白核苷酸和氨基酸同源性分别大于95.2%和98.0%。遗传进化分析结果显示，BZ0162和WS12101与GenBank最新公布的CHN-JL中国株以及泰国株DK/TH/CU-1亲缘关系最近，处于同一进化分支上。分别成功分离到1株鸭源和1株鹅源坦布苏病毒，为进一步探究坦布苏病毒遗传变异及跨宿主传播机制提供了材料。
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鸭肠炎沙门氏菌致病性差异研究
《家禽科学 》 2023
摘要：沙门氏菌是一种革兰氏阴性短杆菌,血清型众多,可引起各种动物的细菌感染.为探究鸭肠炎沙门氏菌的致病性差异,本试验从山东省三个地区采集50份疑似沙门氏菌感染样品,通过细菌分离及PCR扩增目的基因进行鉴定,后通过动物回归试验研究此次分离的沙门氏菌在雏鸭中产生的影响,并通过PCR扩增及Blast比对分析对所分离到的沙门氏菌进行分型.结果显示,从山东省三个地区采集的50份样品中共分离鉴定出5株沙门氏菌;动物回归试验结果显示:5组沙门氏菌中,第5组相较其他组别致死率最高,致死率高达87.5%,其次为2组、4组、3组、1组;通过Blast比对分析,确定分离到的5株菌均为肠炎型沙门氏菌.本试验为山东地区鸭肠炎沙门氏菌流行情况及致病性差异提供了部分理论依据和数据支持.
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超临界CO2萃取制备腰果仁油工艺优化及其脂肪酸成分分析
《食品研究与开发 》 2023 北大核心
摘要：以腰果仁为原料,采用超临界CO2萃取技术萃取腰果仁油,研究萃取温度、萃取压强、萃取时间、C02流量对腰果仁油得率的影响,通过响应面法优化最佳提取工艺条件,采用气相色谱甲酯法对腰果仁油的脂肪酸成分进行分析.结果表明,超临界CO2萃取腰果仁油的最佳条件为萃取温度45℃、萃取压强40 MPa、CO2流量4.2 L/min、萃取时间1.6h,该条件下腰果仁油得率为46.41%,与模型预测结果接近.气相色谱甲酯法对脂肪酸成分分析表明,腰果仁油含有12种脂肪酸成分,其中含量较高的4种脂肪酸成分分别为油酸58.42%、亚油酸18.75%、棕榈酸11.160%、硬脂酸9.890%,不饱和脂肪酸含量达78.21%.
关键词： 腰果仁 超临界CO2萃取 腰果仁油 提取 脂肪酸成分
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生防菌棘孢木霉的分离鉴定及生物学特性研究
《山东农业科学 》 2023
摘要：本试验从羊茅草根际土壤中分离筛选出生防菌株GT30,经形态学和分子生物学鉴定,确定GT30为棘孢木霉,并对其生物学特性和抑菌效果进行研究.结果显示,菌株GT30 菌丝生长较快;孢子梗对生生长,主分支呈树状;分生孢子呈球形,外璧光滑.棘孢木霉GT30 最适生长pH值为 5~6,最适温度为 25~30℃,葡萄糖和牛肉膏分别是GT30 生长所需最佳碳源和氮源,光照有利于GT30 产孢,Mg2+和Ca2+离子可促进GT30 菌丝生长及产孢.平板对峙培养试验表明,棘孢木霉GT30 对大蒜白斑病菌和葡萄炭疽病菌抑制效果较好,抑菌率分别为 63.7%和 61.4%.本研究结果可为开发优异生防木霉菌剂提供菌种资源和理论基础.
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猪流行性腹泻病毒变异毒株的分离鉴定及遗传演化分析
《生物学杂志 》 2022 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病。为了解山东地区PEDV的遗传进化趋势，对2020—2021年收集的疑似猪流行性腹泻的临床病料进行RT-PCR检测。随后将处理好的病料上清液接种于Vero细胞进行PEDV病毒分离，并利用间接免疫荧光（IFA）进行验证，成功分离到一株PEDV毒株，命名为QH-202105。将分离株传代培养至第10代，提取RNA后进行扩增并全基因组测序，结合NCBI下载的参考序列对分离株的全基因组和S基因进行核苷酸同源性比对、系统发育树构建分析，结果显示，分离株与美国分离株USA/Colorado/2013核苷酸同源性最高，为99.1%,与CHM2013株同源性最低，为96.5%。经S基因氨基酸序列分析显示，分离株QH-202105在S基因的N端有60多处突变，两处氨基酸插入（包括第59～62位氨基酸的QGVN 4个氨基酸插入，第145位氨基酸N的插入）和两处氨基酸缺失（第115～118氨基酸的缺失，第167～168氨基酸的缺失）。进化树分析结果显示，分离毒株QH-202105为G2基因群，与CH/HNAY/2015和CH/ZJCX-1/2012亲缘关系最近，属同一进化分支。在此基础上，应用PROVEAN对QH-202105的S蛋白突变氨基酸进行功能预测，结果显示，在1 361处（G→C）被判定为“Deleterious”,可以推测此处的突变对病毒的侵袭力可能存在间接影响。研究结果可为我国PEDV变异株的流行情况及防控提供参考。
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