科研产出
山东地区鸡沙门氏菌耐药性分析
《家禽科学 》 2023
摘要：沙门氏菌是一种寄生在人和动物小肠内的革兰氏阴性直杆菌,可引起急性或慢性人兽共患传染病.本试验通过对山东地区7个地级市共69个养鸡场进行随机采样,利用PCR扩增沙门氏菌目的基因和血清凝集试验的方法对沙门氏菌进行鉴定.结果显示,从山东省各地级市养鸡场采集的2050份样品中共检测出沙门氏菌阳性样品18份,分离菌鉴定均为鸡白痢沙门氏菌,并对阳性菌株进行培养纯化,利用K-B纸片法检测沙门氏菌对氨苄西林、西诺沙星、磺胺异噁唑等11种药物的敏感性.本研究可供山东地区养殖场参考,对沙门氏菌的防控和治疗具有重大意义.
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一种适于PCR的植物内生真菌DNA提取方法及应用
《山东农业科学 》 2022 北大核心
摘要：为了简便快速提取植物内生真菌DNA,本试验对碱裂解法进行改进,以满足基于ITS序列的大规模内生真菌分类鉴定的需要.采用0.500 mol/L的NaOH为提取缓冲液,结合研磨珠、组织破碎仪,经高温裂解和Tris·HCl稀释,制备了PCR扩增的模板溶液.结果表明,此方法可用于白僵菌ITS1/ITS4引物的PCR扩增,且模板溶液稳定性好,室温下至少可存放14 d.将该法用于773个菌株的基于ITS序列的PCR鉴定,711个成功扩增,62个失败,除去5个测序结果双峰菌株,706个得到有效鉴定,分属于68属199种,而ITS扩增失败样本在nLSU引物组合中均得到了成功扩增.该方法简捷高效、经济环保、适应物种广泛,可满足大规模真菌鉴定的需要.
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新型鸭呼肠孤病毒山东株的分离鉴定及致病性分析
《中国兽医杂志 》 2021 北大核心
摘要：本试验采用病毒分离培养、RT-PCR扩增、测序分析、致病性试验等方法,以探索山东菏泽地区商品肉鸭养殖场内樱桃谷鸭脾脏坏死、瘸腿症状的病因。结果显示,鸡胚培养发病鸭的肝脏和脾脏组织悬液分离出1株病毒;该病毒株S1基因与新型鸭呼肠孤病毒的同源性为94%～96%,与鹅呼肠孤病毒的同源性为95%,与番鸭呼肠孤病毒的同源性为49%～50%,与禽呼肠孤病毒同源性为44%～48%,从而确定该病毒株为新型鸭呼肠孤病毒;该病毒株经尿囊腔接种于7日龄SPF鸡胚后,胚体在72～96h内集中死亡,出现水肿、出血症状;该病毒株在Vero细胞上可产生明显的空泡化病变;该病毒株在1日龄雏鸭可回归出与临床一致的脾脏坏死,攻毒后第8周,可观察到50%的鸭发生瘸腿,同时肌肉和关节处可剖检到干酪样物。由此判断,新型鸭呼肠孤病毒感染是导致该养殖场鸭脾脏坏死和瘸腿的主要原因。
关键词： 新型鸭呼肠孤病毒 脾脏坏死 瘸腿 分离鉴定 RT-PCR
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一种基于PCR的简易快速提取植物叶片DNA的方法
《种子 》 2019 北大核心
摘要：传统植物全基因组DNA提取常采用SDS和CTAB法,随着分子生物学技术的快速发展,样品的DNA提取速度已很难满足样品高通量检测的需要。因此,建立基于PCR分析的简便、高效、低成本的DNA提取方法有助于分子生物学试验的开展。本试验改进了传统的DNA提取方法,操作过程中仅需要几种常见的国产分析纯试剂,简单快速、安全无毒,且不污染环境,并选用了27对玉米SSR引物进行了DNA的扩增验证。结果显示,该方法提取的幼苗叶片DNA能够满足基于PCR的玉米自交系的种质类群划分的要求,表明该方法是一种基于PCR的简易、快速提取植物叶片DNA的有效方法。
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甘薯淀粉合成相关酶基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为研究甘薯块根淀粉合成酶基因的表达特征,本研究以淀粉含量不同的两个品种为试验材料,利用转录组数据克隆了甘薯颗粒结合淀粉合成酶GBSS、异淀粉酶ISA、淀粉分支酶SBEⅠ、SBEⅡ的cDNA片段,采用实时荧光定量RT-PCR方法对块根不同生长期淀粉合成相关酶基因的表达进行研究。结果表明,在甘薯不同生长时期,淀粉含量从块根形成期开始逐渐积累,到栽插后80 d、110 d时达到高峰,在块根膨大后期,淀粉含量相对稳定。IbGBSSⅠ、IbSBEⅡ、IbISA 3个基因表达量呈双峰曲线变化,IbSBEⅠ表达呈单峰曲线变化。IbGBSSⅠ、IbISA在栽插后70 d和100 d时表达量达到高峰,IbSBEⅠ在栽插后70 d表达量达到最大。在不同类型甘薯品种中,IbGBSSⅠ在高淀粉品种‘漯徐薯8号’中的表达量显著高于‘郑薯20’,低淀粉品种‘郑薯20’的IbISA表达量显著高于‘漯徐薯8号’。
关键词： 甘薯(Ipomoea batatas L.) 淀粉合成相关酶基因 克隆 荧光定量 RT-PCR 基因表达
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鹅星状病毒LAMP快速检测方法的建立与应用
《中国预防兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：鹅星状病毒是一种新发的可导致雏鹅以痛风为主要特征的传染性病原。为建立鹅星状病毒(AstV)的快速检测方法,本研究根据鹅Ast V ORF1b基因的保守序列设计了一组特异性的LAMP引物,建立鹅AstV的LAMP快速检测方法,并检测其特异性和灵敏度。结果显示:建立的LAMP方法的最佳反应温度为64℃;仅能扩增鹅Ast V,而对鹅细小病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒及鹅源H9N2亚型禽流感病毒均不能扩增;能够检测到的最低模板(cDNA)浓度为1 ng/μL,因此该方法具有较好的特异性和敏感性。临床样品检测结果显示:建立的LAMP方法与RT-PCR方法阳性符合率为95.65%。综上,本研究建立的LAMP方法能够特异、快速地检测新发鹅Ast V,为养殖基地、科研和检验检疫部门提供了一种快速检测该病原的技术手段。
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玉米ZmcpSRP54基因可变剪接分析
《山东农业科学 》 2019
摘要：cpSRP54基因在植物叶绿体发育中发挥重要作用.本研究用生物信息学方法对玉米ZmcpSRP54蛋白进行了进化分析,利用RT-PCR方法对玉米ZmcpSRP54基因全长cDNA进行了克隆,进而对其进行可变剪接分析.结果表明,玉米ZmcpSRP54蛋白与其它7个物种的cpSRP54蛋白有很高的相似性.鉴定到玉米ZmcpSRP54基因25个不同转录本,1个为标准剪接转录本,其它24个为可变剪接转录本.24个可变剪接转录本共使用了17种非标准剪接位点,4种可变剪接方式,主要以可变的3′端位点、可变的5′端位点和外显子跳跃3种可变剪接方式为主.预测出18种不同长度的ORF,编码18种不同长度的多肽.11个多肽其保守结构域氨基酸序列发生部分缺失,6个多肽其保守结构域氨基酸序列发生全部缺失,1个编码全新的多肽.这些结果将为玉米ZmcpSRP54基因的功能研究提供重要信息.
关键词： 玉米 ZmcpSRP54基因 RT-PCR 可变剪接
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株。通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%。本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考。
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014-2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率.结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株.通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%.本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考.
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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