科研产出
中药材五灵脂特异性PCR鉴别方法的研究
《食品与药品 》 2018
摘要：目的建立快速检测五灵脂中药材动物源性成分的特异性PCR法。方法从NCBI数据库下载复齿鼯鼠及相关混伪品的16S rDNA序列,通过比对获得特异性DNA片段,设计特异引物,从复齿鼯鼠的干燥粪便中提取DNA,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后扩增出一条340 bp左右条带,而其他样品在相同条件下无扩增条带,该引物的灵敏度可达4.43ng/μl。对15种市售药材的检测结果证明该方法简便可行。结论此PCR法可快速鉴别五灵脂,不受材料和干燥程度的影响,具有操作简便、快速、特异性高的优点。
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株。通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%。本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考。
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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不同ELISA试剂盒与PCR法检测鸡新城疫病毒的比对试验与研究
《家禽科学 》 2018
摘要：分别采用A、B、C公司的商品化新城疫病毒ELISA检测试剂盒和PCR法对50份临床疑似新城疫病料进行新城疫病毒检测方法的比对试验与研究,其中以La Sota疫苗株作阳性对照,SPF鸡胚尿囊液作阴性对照。结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒的检测结果与PCR检测结果的阳性符合率分别为:94.1%、91.2%、85.3%;阴性符合率分别为:93.8%、87.5%、81.3%;阴阳性总体符合率分别为:92%、92%、84%。A、B、C三个公司的ELISA抗原检测试剂盒的检测时间分别为4、3、3h。产品价格分别为1800、1300、1100元。由此可以看出,间接ELISA法是一种检测结果准确,成本相对较低,省时省力,适用于大批量的新城疫病毒检测方法。与此同时,不同公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒在敏感性、准确性、试验时长和价格上均存在较大差异,综合分析,B公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒价格适中、敏感性高、准确性高,可以在临床上进行推广应用。
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014-2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率.结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株.通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%.本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考.
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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H9N2亚型禽流感荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
《黑龙江畜牧兽医 》 2017 北大核心
摘要：为了研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在家禽体内各个器官的分布,试验针对H9N2亚型AIV的HA基因设计1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin的引物,以阳性重组质粒作为标准品做标准曲线,建立荧光定量RT-PCR检测方法,并对人工感染H9N2的SPF雏鸡气管、胸腺、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、肠等器官进行3次重复检测。结果表明:该法线性关系R值均在0.99以上,检测极限均为10拷贝质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性好,批内和批间重复性试验变异系数均小于1%。通过比较各器官HA相对表达量,得出肠和胰腺中HA相对表达量最高,腺胃次之,脾脏、肝脏、胸腺、法氏囊中含量也比较高,气管、肺脏、肾脏中含量较低,其中肾脏含量最低。说明研究建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR方法灵敏度高,特异性强。
关键词： H9N2亚型禽流感病毒 HA基因 RT-PCR 检测 病毒分布
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石榴果皮POD基因的克隆与序列分析
《山东农业科学 》 2017
摘要：本研究以‘泰山红’石榴果实为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆果皮中POD基因cDNA片段,利用BLAST和ORF Finder分析其核苷酸序列,并利用Prot Param、SPOMA、DANMAN等软件分析其氨基酸序列。结果表明,克隆得到1 092 bp的cDNA片段,该基因含828 bp的CDS序列,编码276个氨基酸。该基因核苷酸序列与烟草、茜草、花生二倍体杂生种和潘那利番茄等植物的相似性分别为77%、77%、76%和76%;氨基酸序列与荔枝、克莱门柚、苹果和白梨的相似性分别为89%、87%、84%和84%;Gen Bank登录号为KY129694。预测蛋白质理论分子量为30 582.59 D,等电点(p I)为8.83,具有过氧化物酶完整的保守结构域,含有Cd00693和Cl00196两个保守功能域,为亲水性蛋白;蛋白质二级结构主要由无规则卷曲(38.41%)、α-螺旋(37.68%)、延伸链(13.77%)和β-转角(10.14%)组成。该研究结果为揭示石榴果实褐变机理奠定了理论基础。
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我国口蹄疫流行血清型RT-PCR鉴别诊断技术的建立
《中国病原生物学杂志 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：目的建立口蹄疫流行株不同血清型RT-PCR的鉴别诊断技术,为有效防控口蹄疫提供技术支撑。方法根据GenBank中的A型、O型、Asia1型口蹄疫病毒的全基因组核酸序列,用Primer 5.0设计该3型口蹄疫病毒的通用引物及特异性分型引物,建立RT-PCR方法,采用1%琼脂糖凝胶电泳结合测序技术对引物的特异性和广谱性进行分析。结果 1%琼脂糖电泳结果表明通用引物P1/P2能同时特异性扩增A、O、Asia1型口蹄疫病毒,扩增片段大小为457bp,与预期值相一致。A、O、Asia1型分型引物只能扩增相应亚型口蹄疫病毒的目的基因片段(大小分别为320、240和460bp),与预期值相一致。不能扩增其他2种亚型。Blast比对显示分型引物扩增产物序列经测序验证与其亚型完全对应,同源性为84%~99%。结论建立的RT-PCR诊断技术对口蹄疫病毒通用型扩增具有广谱性,对基因亚型分型具有特异性,可用于口蹄疫病检测及其流行病学调查。
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