科研产出
马铃薯X病毒外壳蛋白基因的克隆及其原核表达载体的构建
《中国马铃薯 》 2002
摘要：将来源于国际马铃薯中心 (InternationalPotatoCenter ,ClP)PVX病毒毒源接种至烟草上 ,对表现明显症状的烟草叶片提取马铃薯病毒X (PVX)总RNA ,人工合成引物P1、P2 ,通过RT PCR扩增合成PVX cp的cDNA ,井将其克隆到pGEM T载体上。经限制酶谱分析后进行全序列测定 ,结果表明 :该基因由 714个核苷酸组成 ,编码 2 38个氨基酸 ,与文献 (分别来源于亚洲、非洲和欧洲 )报道的 4个 pVX cp基因相比同源性为 81%～ 95 % ,其编码的氨基酸同源性均在 90 %以上。说明PVX cp具有较高的保守性。用内切酶将PVX cp基因自克隆载体 pGEM切下 ,定向插入到表达质粒 pBV2 2 0的启动子Pr、Pl的下游 ,构建了该基因的原核表达载体pBV pvx ,为进行该基因的原核表达和抗血清的制备奠定了基础。
关键词： 马铃薯X病毒 外壳蛋白基因 RT-PCR 序列分析
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传染性支气管炎病毒山东及北京分离株血清型及RFLP基因分型的比较研究
《中国兽医杂志 》 2002 北大核心
摘要：分离并鉴定出山东省不同地区的 IBV分离株 A、B、C、D和北京分离株 F,利用中和试验分别对各分离株及标准株M4 1 、T等进行血清分型。设计一对引物 ,分别对各毒株的 S1 基因进行 RT- PCR扩增 ,扩增片段长约 170 0 bp,利用其 PCR产物进行 Hae 酶切 ,根据酶切图谱 ,进行基因分型。结果表明 :A、C、D和 M4 1 酶切图谱相同 ,属 Mass基因型 ,分别为 90 0、4 0 0和30 0 bp左右的片段 ;北京 F株有 4条酶切条带 ,与 4 /91基因型不同 ,分别为 10 0 0、30 0、2 0 0和小于 10 0 bp左右的片段 ;B株有4条酶切条带 ,理论推断与 T株相似 ,分别为 70 0、5 0 0、30 0和 180 bp左右的片段 ,可能为同一基因型。血清学分型结果与基因分型结果不符。
关键词： 传染性支气管炎病毒 血清型 RT-PCR RFLP 基因型
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大肠杆菌免疫刺激DNA的克隆及其对抗体产生的影响
《中国预防兽医学报 》 2002 北大核心 CSCD
摘要：利用聚合酶链式反应 (PolymeraseChainReaction ,PCR)从大肠杆菌基因组中扩增免疫刺激基因 ,并把扩增的基因片段克隆入pGEM_T载体。PstⅠ酶切结果表明重组质粒 (rP)均含有扩增的基因片段 ;rP1与rP2是相同的重组质粒。利用酶联免疫吸附试验检测了重组质粒对小鼠产生抗体的影响 ,结果显示 :重组质粒 1与牛血清白蛋白 (BSA) ,免疫小鼠能产生较高的抗体水平 ,而重组质粒 3则对小鼠产生的BSA抗体水平没有影响。对重组质粒 1的序列分析表明 ,克隆的基因片段中富含CpG序列 ,并含有数个具有强烈免疫刺激作用的RRCGYY(如 :AACGTT)序列。本研究为基因免疫机理的深入研究和基因免疫佐剂的开发奠定了基础
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花生种子未成熟叶片简单预处理PCR技术的建立与应用
《花生学报 》 2001
摘要：介绍了一种快速廉价直接用于PCR的花生种子未成熟叶片预处理技术 ,其结果稳定可靠 ,利用该技术已成功地克隆了RS和DES两个基因片段。该项技术在花生分子标记、转化体筛选鉴定和基因分离等研究中具有广阔的应用前景
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利用aroA基因建立鸡传染性鼻炎PCR诊断方法
《中国兽医科技 》 2001 北大核心 CSCD
摘要：利用aroA基因设计了 1对引物 ,分别对 10株标准副鸡嗜血杆菌 (HPG)菌株、14株分离的HPG菌株进行PCR扩增 ,结果均得到了与预期大小一致的片段 ,而对 10株非HPG菌株和 3株病毒进行扩增则无相应片段产生 ;该PCR能检测出 10个菌细胞。与常规PCR方法相比 ,aroA PCR的敏感性更高
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鸡传染性喉气管炎病毒TK基因的克隆与鉴定
《中国兽医科技 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：根据鸡传染性喉气管炎病毒 (ILTV)TK基因的核苷酸序列 ,设计并合成了 1对引物 ,利用该对引物扩增出了长180 0bp的TK基因核苷酸片段。将该基因克隆入PGEM T载体后 ,对其进行酶切分析和序列测定。结果表明 ,扩增片段与发表的ILTV的TK基因核苷酸序列一致。以ILTV、正常绒毛尿囊膜组织、鸡传染性支气管炎病毒 (IBV)、鸡新城疫病毒 (NDV)感染鸡胚的尿囊膜DNA为模板进行PCR反应 ,结果该PCR反应体系对ILTV是特异的。敏感性试验表明 ,该PCR系统能检出 5 0 pg的ILTV感染尿囊膜的DNA。
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鸡传染性喉气管炎病毒PCR诊断方法的研究
《山东农业科学 》 1999
摘要：根据已知的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) gp60 基因自行设计引物,对ILTV 的PCR诊断方法进行研究。以ILTV- SD 分离株、ILTV- Vac 疫苗株DNA 为模板进行扩增,得到了422bp大小的扩增片段,经序列分析发现2 个毒株的gp60 基因序列相同。用MDV、HVT以及正常绒尿膜组织的DNA作PCR,结果为阴性。PCR和病毒分离方法均能在人工感染2 ～8 天的鸡样中检测到ILTV,二者对12 个田间样品的阳性检测率分别为8/12 和4/12 。结果表明,所建PCR方法具有高度特异性,比病毒分离方法更为敏感、快速、简便。
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