科研产出
甜樱桃病毒病分子检测技术的研究
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立简便、快速、高效、准确的甜樱桃病毒分子检测方法。【方法】根据我国甜樱桃病毒病害的发生特点,先后建立和完善了几种主要病毒的单重RT-PCR、多重RT-PCR、纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法,并对各检测方法的适用范围、检测效率进行比较分析。【结果】改进后的单重RT-PCR方法利用随机引物反转录得到的c DNA模板可同时用于多种病毒的特异性检测。多重RT-PCR方法可在同一管PCR反应中同时检测多种病毒。运用纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法在植物病毒核酸提取环节简化了操作程序。【结论】该检测技术体系已应用于山东地区甜樱桃及中国樱桃等大批量植物样本的病毒检测工作之中,检测结果稳定、可靠。
关键词： 甜樱桃 病毒 检测 RT-PCR 多重RT-PCR 纳米磁珠
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石榴F3’H基因PCR反应体系的研究
《湖北农业科学 》 2013 北大核心
摘要：从石榴(Punica granatum L.)泰山红品种的花瓣中提取总RNA并反转录得到cDNA。设计简并引物对石榴类黄酮3’-羟化酶(F3’H)基因进行PCR扩增,筛选合适的引物及退火温度。结果表明,适合石榴F3’H基因扩增的正反向引物分别为5′-CGTNGAYGTBGTBGTBGCSKCVTC-3′,5′-TCHCCDGCWATG-GCCCAHAYRTT-3′。PCR反应程序为94℃预变性5 min;94℃变性40 s,54℃退火45 s,72℃延伸60 s,共35个循环;72℃保温10 min。
关键词： 石榴(Punica granatum L.) F3’H基因 PCR
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槭树叶片类黄酮糖基转移酶基因RT-PCR扩增体系优化
《山东农业科学 》 2013
摘要：以槭树"秋天火焰"变色期秋季叶片为试材,采用改良CTAB法提取叶片总RNA,利用GenBank中相关物种的UFGT基因序列设计特异引物,进行RT-PCR扩增并对RT-PCR反应体系中的引物、退火温度和循环次数进行优化,建立了槭树叶片UFGT基因的RT-PCR扩增反应体系。
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利用AhMITE1转座子分子标记鉴定花生F_1代杂种
《花生学报 》 2012
摘要：对杂交后代进行杂种的真实性鉴定是杂交育种成功的前提。AhMITE1转座子标记是一类基于PCR的分子标记,其在花生中扩增的产物片段差异大,多态性强,采用琼脂糖凝胶电泳即可区分。本研究用7对多态性转座子引物对6个花生组合的166个F1单株进行了真实性鉴定。根据杂种植株含有父母本带型为依据共鉴定出了77个单株为真杂种,真杂种植株数占植株总数的比率为44.86%;收获时根据田间表型鉴定出了79个单株为真杂种,真杂种比率为47.59%。
关键词： 花生 杂种鉴定 分子标记 转座子 AhMITE1 PCR
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萝卜EST-SSR标记PCR反应体系的建立与优化
《长江蔬菜 》 2012
摘要：采用L16(45)正交试验设计优化了萝卜EST-SSR标记的PCR反应体系,建立了适于20μL PCR技术体系的最佳浓度:DNA模板65 ng/20μL,Mg2+0.8 mmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,引物0.8μmol/L,Taq DNA酶0.4 U/20μL,且Mg2+对该体系的影响最大。利用10对EST-SSR引物对该体系的验证结果表明,本研究建立的萝卜EST-SSR PCR体系重复性好、条带清晰、多态性丰富,对萝卜的种质资源的鉴定与评价、分子标记辅助选择育种等多方面都有重要作用。
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玉米叶面微生物DNA提取方法及PCR引物的筛选
《山东农业科学 》 2012
摘要：传统的微生物培养方法在反映叶面微生态信息上具有局限性,因此逐渐被分子生态学所代替,而获得高质量、大片段、无偏好的总DNA是研究叶面环境微生物的基础。本文采用改进的Sambrook法、CTAB法、改良的化学法以及试剂盒法对玉米生长初期、中期、末期的叶面微生物总DNA进行提取,并对4种方法提取的DNA片段的大小和产量进行综合评价。将得到的DNA用引物357/518以及984/1387对细菌16S rDNA进行扩增;用5种常见引物NS1/fung、ITS1-F/ITS2、NS1/AM1、EF4/fung5、SSU-0817/SSU-1196对真菌18SrDNA进行扩增。结果表明:4种方法提取的DNA片段均适用于PCR,但DNA的得率和纯度有一定差别,其中以试剂盒提取效果最好。PCR结果显示,除化学法外,其他3种方法提取的DNA均能够获得目的条带;并通过比较得出引物984/1387对16S rDNA以及ITS1-F/ITS2对18S rDNA扩增效果较好且扩增量最大。
关键词： 玉米 叶面微生物 DNA提取 PCR 16SrDNA 18SrDNA
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SYBR Green I实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒定量分析中的应用
《植物保护学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了探讨SYBRGreenI实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒粒子定量分析中的应用前景,以复合感染李属坏死环斑病毒(Prunusnecrotic ringspot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune Dwarf vi-rus,PDV)、樱桃病毒A(CherryvirusA,CVA)、樱桃小果病毒一2(Little cherry virus一2,LChV-2)的甜樱桃"红灯"PrunusaviumCV.RedLamp植株为研究对象,采用相对定量方法,分析各病毒的外壳蛋白基因的表达,用以指示病毒的增殖量.在花、幼叶、功能叶、衰老叶中均能检测到4个基因,但各基因表达量在各器官中存在差异.PNRSV-CP与CVA-CP表达模式相似,功能叶中明显高于其它器官,衰老叶中急剧降低.PDV-CP与LChV2一卯表达模式类似,幼叶中的表达量较高,功能叶片中较低.PNRSV-CP在花、功能叶中的表达显著高于其它3个病毒基因.LChV2一cP在各器官中的表达量均低于其余3个基因.该方法适用于植物组织内多种甜樱桃病毒增殖量的分析.
关键词： 李属坏死环斑病毒 李矮缩病毒 樱桃病毒A 樱桃小果病毒-2 实时定量RT PCR
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山东水稻黑条矮缩病毒dsRNA提取与RT-PCR检测研究
《山东农业科学 》 2012
摘要：水稻黑条矮缩病是由灰飞虱和白背飞虱等传播的病毒性病害,给水稻生产带来严重危害。通过提取水稻黑条矮缩病毒dsRNA发现,感病植株的dsRNA凝胶电泳存在8条带,而健康植株是空白结果,与报道的玉米粗缩病毒结果相同。根据水稻黑条矮缩病毒基因组序列的信息,在其S1和S10片段分别设计合成两对引物,对感染病毒植株和健康植株进行扩增,可在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病毒基因组特有的条带,而在健康植株中未能扩增出条带。利用此种方法可以建立水稻黑条矮缩病检测体系,对水稻黑条矮缩病进行早期检测和预报。
关键词： 水稻黑条矮缩病 dsRNA 病毒检测 RT-PCR
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