科研产出
SYBR Green I实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒定量分析中的应用
《植物保护学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了探讨SYBRGreenI实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒粒子定量分析中的应用前景,以复合感染李属坏死环斑病毒(Prunusnecrotic ringspot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune Dwarf vi-rus,PDV)、樱桃病毒A(CherryvirusA,CVA)、樱桃小果病毒一2(Little cherry virus一2,LChV-2)的甜樱桃"红灯"PrunusaviumCV.RedLamp植株为研究对象,采用相对定量方法,分析各病毒的外壳蛋白基因的表达,用以指示病毒的增殖量.在花、幼叶、功能叶、衰老叶中均能检测到4个基因,但各基因表达量在各器官中存在差异.PNRSV-CP与CVA-CP表达模式相似,功能叶中明显高于其它器官,衰老叶中急剧降低.PDV-CP与LChV2一卯表达模式类似,幼叶中的表达量较高,功能叶片中较低.PNRSV-CP在花、功能叶中的表达显著高于其它3个病毒基因.LChV2一cP在各器官中的表达量均低于其余3个基因.该方法适用于植物组织内多种甜樱桃病毒增殖量的分析.
关键词： 李属坏死环斑病毒 李矮缩病毒 樱桃病毒A 樱桃小果病毒-2 实时定量RT PCR
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1型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建
《家禽科学 》 2011
摘要：参考1型鸭肝炎病毒基因组序列,设计7条引物,用RT-PCR方法扩增出覆盖整个病毒基因组三个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆。测序结果表明,该克隆与母本毒序列同源性达99.6%,并且5'端的T7启动子和3'端的MluⅠ线性化位点均成功引入。
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石榴花二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因RT-PCR扩增体系的建立与优化
《山东林业科技 》 2011
摘要：分别以红花和粉花石榴‘泰山红’、‘重瓣粉花’盛花期花瓣为材料,提取RNA后进行反转录,对DFR基因的PCR扩增体系进行了优化,建立了高效、特异的石榴花DFR基因的RT-PCR扩增体系,为克隆基因全长奠定了基础。
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一株韩国新型DHV的分离及RT-PCR鉴定
《浙江农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：从山东省某疑似鸭肝炎发病区分离到1株病毒JFX08,血清中和试验结果表明该分离毒与传统的Ⅰ型鸭肝炎病毒无交叉保护,分离毒回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。根据已公布的韩国新型(基因C型)DHV的序列设计合成一对引物,进行RT-PCR扩增,得到大小约414 bp的目的条带;测序分析发现,分离毒与传统Ⅰ型DHV之间的相似性较低,而与韩国新型DHV之间的相似性高达93.2%~94.0%;进化分析结果表明,该分离毒与韩国新型DHV的遗传距离最近,属基因C型DHV。
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山东省局部地区番茄黄化曲叶病毒的分子鉴定
《山东农业科学 》 2010
摘要：近年来山东省部分地区发现番茄黄化曲叶症状。为了确定这种疑似病毒,利用双生病毒外壳蛋白(CP)基因及DNA-A基因组的引物对枣庄、菏泽和淄博的染病番茄叶片进行了检测,测序分析表明这种病毒是番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)。系统发育分析结果表明,该病毒可能是由我国东南沿海地区和日本传入的。
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龙葵SorMT2a和SorMT2c基因的克隆及其转化烟草研究
《山东农业科学 》 2010
摘要：以龙葵为试验材料,利用RT-PCR技术分离到2个长度不同的编码Ⅱ类MT(金属硫蛋白)的cDNA克隆SorMT2a(EU760481)和SorMT2c(EU760483),成功构建植物表达载体pROKⅡ-SorMT2a和pROKⅡ-SorMT2c,通过农杆菌介导法转化烟草并通过PCR验证了基因的表达情况。与野生植株相比,转SorMT2a和SorMT2c基因烟草对镉的耐受性不同,有的转SorMT2a基因植株在MS培养基中的CdCl2浓度达到200μmol/L时仍然生长良好,生物量和株高均大于野生型植株;而转SorMT2c基因植株对镉的耐受性没有提高。这说明SorMT2a基因在植物对镉的耐受性中起作用,而SorMT2c基因则不起作用,从而也说明了同一类基因不同家族可能具有不同功能。
关键词： 龙葵 金属硫蛋白 重金属 RT-PCR SorMT2a SorMT2c
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基于PCR的染色体步移中单引物扩增的克服与非特异引物的利用
《中国生物化学与分子生物学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：基于PCR的染色体步移(PCR-Walking)方法已有许多种,包括反向PCR、连接介导的PCR、随机引物PCR等.在众多的方法中,经常存在由通用引物引起的单引物非特异扩增现象.本文综述了连接介导的PCR-Walking中单引物扩增的形成原理及克服方法.克服单引物扩增主要是使接头引物在DNA两端的接头上只有1个结合位点,从而避开单引物扩增.常用的方法有3′端加氨基修饰的不对称接头、泡泡状接头或Y字型接头及单寡核苷酸接头等方法.还介绍了2种利用通用引物非特异扩增克隆目的序列的方法:引物错配法及基于RAPD原理的单引物PCR法.
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一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法
《安徽农业科学 》 2010 北大核心
摘要：[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进,获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法,并以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。
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