科研产出
一种适于PCR的植物内生真菌DNA提取方法及应用
《山东农业科学 》 2022 北大核心
摘要：为了简便快速提取植物内生真菌DNA,本试验对碱裂解法进行改进,以满足基于ITS序列的大规模内生真菌分类鉴定的需要.采用0.500 mol/L的NaOH为提取缓冲液,结合研磨珠、组织破碎仪,经高温裂解和Tris·HCl稀释,制备了PCR扩增的模板溶液.结果表明,此方法可用于白僵菌ITS1/ITS4引物的PCR扩增,且模板溶液稳定性好,室温下至少可存放14 d.将该法用于773个菌株的基于ITS序列的PCR鉴定,711个成功扩增,62个失败,除去5个测序结果双峰菌株,706个得到有效鉴定,分属于68属199种,而ITS扩增失败样本在nLSU引物组合中均得到了成功扩增.该方法简捷高效、经济环保、适应物种广泛,可满足大规模真菌鉴定的需要.
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一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法(摘要)(英文)
《Agricultural Science & Technology 》 2010
摘要：[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进(省去液氮研磨和苯酚提取的步骤),获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法。于1.5ml Eppendorf管内加入400μl DNA提取液[内含200 mmol/LTri(pH值7.5),25 mmol/LEDTA(pH值8.0),250 mmol/LNaCl,0.5% SDS(W/V)],剪取拟南芥叶片材料少许(1片以下)加入400μl DNA提取液,用微型研磨棒将叶片捣碎至溶液成绿色,放置3 ～5 min;加入400μl氯仿/异戊醇(体积比24:1),混合均匀,12 000 r/min离心5 min;取上清液至另一1.5 ml Eppendorf管内,加入300μl异丙醇,颠倒混合均匀,室温下放置5 min,12 000 r/min离心5 min;弃去上清液,以70%乙醇漂洗,放置晾干,加入100μl灭菌超纯水溶解,4℃放置备用。以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。
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一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法
《安徽农业科学 》 2010 北大核心
摘要：[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进,获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法,并以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。
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