一种适于PCR的植物内生真菌DNA提取方法及应用

李瑞平; 宋莹莹; 李丽莉; 孙康文; 门兴元; 尹淑艳; 《山东农业科学 》 2022 北大核心

摘要：为了简便快速提取植物内生真菌DNA,本试验对碱裂解法进行改进,以满足基于ITS序列的大规模内生真菌分类鉴定的需要.采用0.500 mol/L的NaOH为提取缓冲液,结合研磨珠、组织破碎仪,经高温裂解和Tris·HCl稀释,制备了PCR扩增的模板溶液.结果表明,此方法可用于白僵菌ITS1/ITS4引物的PCR扩增,且模板溶液稳定性好,室温下至少可存放14 d.将该法用于773个菌株的基于ITS序列的PCR鉴定,711个成功扩增,62个失败,除去5个测序结果双峰菌株,706个得到有效鉴定,分属于68属199种,而ITS扩增失败样本在nLSU引物组合中均得到了成功扩增.该方法简捷高效、经济环保、适应物种广泛,可满足大规模真菌鉴定的需要.

关键词： 内生真菌 PCR DNA快速提取 碱裂解法