文献类型： 中文期刊
作者： 李瑞平 1 ; 宋莹莹 2 ; 李丽莉 2 ; 孙康文 1 ; 门兴元 2 ; 尹淑艳 1 ;
作者机构： 1.山东农业大学植物保护学院
2.山东省农业科学院植物保护研究所
关键词： 内生真菌;PCR;DNA快速提取;碱裂解法
期刊名称： 山东农业科学
ISSN： 1001-4942
年卷期： 2022 年 54 卷 012 期
页码： 143-149
收录情况： 北大核心
摘要： 为了简便快速提取植物内生真菌DNA,本试验对碱裂解法进行改进,以满足基于ITS序列的大规模内生真菌分类鉴定的需要.采用0.500 mol/L的NaOH为提取缓冲液,结合研磨珠、组织破碎仪,经高温裂解和Tris·HCl稀释,制备了PCR扩增的模板溶液.结果表明,此方法可用于白僵菌ITS1/ITS4引物的PCR扩增,且模板溶液稳定性好,室温下至少可存放14 d.将该法用于773个菌株的基于ITS序列的PCR鉴定,711个成功扩增,62个失败,除去5个测序结果双峰菌株,706个得到有效鉴定,分属于68属199种,而ITS扩增失败样本在nLSU引物组合中均得到了成功扩增.该方法简捷高效、经济环保、适应物种广泛,可满足大规模真菌鉴定的需要.
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