科研产出
马铃薯卷叶病毒与S病毒重组双CP多克隆抗体的制备
《华北农学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：为了制备出马铃薯卷叶病毒（PLRV）与S病毒（PVS）重组双CP多克隆抗体并用于PLRV与PVS这2种病毒的间接与DAS-ELISA检测，构建了PLRV与PVS融合双CP基因的原核表达载体pET22b-LRCP/SCP,用超声破碎法代替溶菌酶法裂解重组菌BL21（pET22b-LRCP/SCP）并提取菌体蛋白，用镍离子亲和层析纯化获得了分子质量为51.2 ku的高纯度的重组双CP。用该重组双CP作抗原免疫家兔获得了高效价（1∶128 k）抗血清。纯化的重组双CP多克隆抗体与PLRV或PVS阳性标准物特异性结合，与另外4种马铃薯主要病毒（PVX、PVY、PVA与PVM）无交叉反应。间接ELISA反应中，稀释度为1∶3 200的重组双CP多克隆抗体与PLRV或PVS阳性物都呈现阳性反应；在DAS-ELISA反应中，稀释度均为1∶100的重组双CP多克隆抗体及其碱性磷酸酶标记物与PLRV或PVS的阳性标准物也分别呈现阳性反应。结果表明，制备的重组双CP抗体既可用于PLRV与PVS这2种病毒的间接ELISA检测，也可用于DAS-ELISA检测。
关键词： 马铃薯卷叶病毒 S病毒 重组双CP 多克隆抗体 间接ELISA DAS-ELISA
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动物性食品中雌激素检测方法研究进展
《食品安全质量检测学报 》 2020
摘要：雌激素作为典型的内分泌干扰物,可在动物体内蓄积,并通过食物链传递进入人体,引起发育、生殖、行为等方面的异常变化,严重危害人体健康.鉴于雌激素的危害性以及在动物性食品中的普遍存在性,精确分析动物食品中雌激素含量可以有效评估食品安全风险,对保障消费者的安全至关重要.因此,建立准确检测动物性食品中雌激素的方法已成为研究热点.本研究综述了近年来国内外动物性食品中雌激素检测的主要方法,包括高效液相色谱及质谱联用法、气相色谱质谱联用法等传统检测方法,以及电化学法、免疫法及光谱法等新型检测方法,并对这些方法进行对比和总结,以期为雌激素检测方法的进一步发展提供依据和策略.
关键词： 雌激素 动物性食品 气相色谱-质谱联用法 酶联免疫吸附法
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副结核分支杆菌MAP0862蛋白的表达及临床应用
《山东农业科学 》 2019
摘要：本研究以腹泻牛粪便基因组DNA为模板,扩增MAP0862基因,构建重组表达载体pET-30a(+)-MAP0862和pEGX-6P-1-MAP0862,通过原核表达系统表达His-MAP0862和GST-MAP0862蛋白,经纯化后制备兔源高免血清,建立ELISA特异性检测方法,最后将纯化蛋白和ELISA方法用于牛副结核病临床样品检测,并对检测数据进行分析。结果表明,以MAP0862蛋白为检测原建立的ELISA检测方法在临床样品检测中具有较高的特异性和敏感性,说明MAP0862蛋白适用于副结核病抗体检测。本研究建立的ELISA检测方法可有效检测临床样品中副结核病的感染。
关键词： 副结核病 MAP0862蛋白 ELISA 副结核分枝杆菌
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不同公司ELISA试剂盒与HI法检测鸡新城疫抗体的比较
《家禽科学 》 2019
摘要：分别采用A、B、C三个公司的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒和血凝抑制(HI)试验方法对168份临床免疫鸡血清和标准阴阳性血清进行新城疫抗体监测方法的比对试验与研究,比较间接ELISA和血凝抑制(HI)两种试验方法的相关性.研究结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化间接ELISA抗体检测试剂盒的检测结果与血凝抑制(HI)试验的阳性符合率分别为98%、96.7%、90.2%;阴性符合率分别为86.7%、80%、86.7%;阴阳性总体符合率分别为97%、95.2%、89.9%;A、B、C三个公司的ELISA抗体检测试剂盒的检测时间分别为2.5、3、3h.产品价格分别为1100、800、700元.比较发现,间接ELISA方法是一种快速、敏感、特异的血清学诊断方法,不同公司生产的商品化ELISA抗体检测试剂盒在敏感性、特异性和检测时间上均存在较大的差异,综合分析,B公司生产的商品化酶联免疫吸附试验(ELISA)抗体检测试剂盒成本较低,敏感性较高,可以用于临床样本的大规模检测.
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兔出血症病毒间接ELISA抗体检测方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为建立兔出血症病毒(RHDV)的血清学检测方法,本实验通过生物信息学分析,将RHDV衣壳蛋白VP60的3个区域VP60-1(aa2-aa208)、VP60-2(aa174-aa425)和VP60-3(aa342-aa579)分别进行原核表达,获得了大小为42 ku、47.5 ku和45.6 ku的重组蛋白。经ELISA和western blot试验分析显示3种重组蛋白均能够被RHDV阳性血清识别,但VP60-1较VP60-2和VP60-3具有更好的反应原性,因此以表达的重组蛋白VP60-1作为包被抗原建立了RHDV间接ELISA抗体检测方法。结果显示,该方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,对不同免疫期兔血清的检测结果与HI呈显著相关性。对临床样品的检测结果表明该ELISA方法比HI试验更敏感。本研究以VP60-1为包被抗原建立的ELISA方法可以用于RHDV疫苗的免疫评估。
关键词： 兔病毒性出血症 VP60蛋白 原核表达 间接ELISA
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不同ELISA试剂盒与PCR法检测鸡新城疫病毒的比对试验与研究
《家禽科学 》 2018
摘要：分别采用A、B、C公司的商品化新城疫病毒ELISA检测试剂盒和PCR法对50份临床疑似新城疫病料进行新城疫病毒检测方法的比对试验与研究,其中以La Sota疫苗株作阳性对照,SPF鸡胚尿囊液作阴性对照。结果表明,A、B、C三个公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒的检测结果与PCR检测结果的阳性符合率分别为:94.1%、91.2%、85.3%;阴性符合率分别为:93.8%、87.5%、81.3%;阴阳性总体符合率分别为:92%、92%、84%。A、B、C三个公司的ELISA抗原检测试剂盒的检测时间分别为4、3、3h。产品价格分别为1800、1300、1100元。由此可以看出,间接ELISA法是一种检测结果准确,成本相对较低,省时省力,适用于大批量的新城疫病毒检测方法。与此同时,不同公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒在敏感性、准确性、试验时长和价格上均存在较大差异,综合分析,B公司生产的商品化ELISA抗原检测试剂盒价格适中、敏感性高、准确性高,可以在临床上进行推广应用。
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鸡传染性支气管炎病毒N蛋白的表达及ELISA诊断试剂盒的研制与应用
《浙江农业科学 》 2018
摘要：为了建立一种鸡传染性支气管炎抗体检测的ELISA方法,本研究根据GenB ank中的传染性支气管炎病毒(IBV)山东分离株LC2的N基因序列,设计一对引物,扩增N基因,将目的基因与载体pE T-32a(+)连接,构建重组表达质粒pE T-32a-N,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pE T-32a-N,纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白为抗原建立鸡传染性支气管炎抗体检测的间接ELISA方法,并利用所建立的ELISA方法对临床血清样本进行检测。结果表明,IBV N基因可在大肠杆菌中稳定、高效地表达。Western-blot检测表明,表达的重组蛋白能与鸡传染性支气管炎阳性血清发生特异性反应。确定间接ELISA方法的抗原最佳包被浓度为2μg·孔~(-1),血清最佳稀释度为1:200,临界值为D450值≥0.297,建立的ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性。该方法与进口IDEXX试剂盒的符合率为96.25%,初步临床应用结果表明该方法可用于雏鸡传染性支气管炎母源抗体和免疫后抗体的消长变化的检测。综上所述,本研究所建立的N-ELISA方法是一种有效的鸡传染性支气管炎病血清学诊断的方法,并为进一步研究IBV N蛋白的免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 N基因 表达 ELISA 抗体 检测
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鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立与应用
《中国兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：参照IBV S1基因序列,RT-PCR扩增长约867bp的S1基因主要抗原区域,将目的片段定向克隆到pET30α原核表达载体,转化Rossetta表达菌,经IPTG诱导后获得了以包涵体形式表达的重组S1蛋白。重组蛋白纯化后,经免疫印迹检测证明具有良好的免疫活性。以该蛋白作为包被抗原,经间接ELISA反应条件的优化,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)抗体的间接ELISA检测方法。该方法与其他6种常见禽病病毒(H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)、H9亚型禽流感病毒(H9-AIV)、新城疫病毒(NDV)、减蛋综合征病毒(EDSV)、鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)、鸡法氏囊病毒(IBDV))阳性血清不发生交叉反应;批内和批间重复性试验的变异系数分别小于5%和10%;相对于HI试验的符合率、敏感性、特异性分别为91.58%、91.24%和92.31%;相对于IDEXX ELISA的符合率、敏感性、特异性分别为94.55%、95.42%和92.96%;应用该方法检测山东及周边地区2 685份免疫鸡和168份未免疫鸡血清样品,免疫合格率和阳性感染率分别为85.25%和17.26%。本试验截短表达的S1蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA抗体检测方法具有良好的敏感性、特异性、重复性和临床适用性,将为IBV的免疫抗体监测、临床野毒感染快速诊断和流行病学调查提供了一种新的血清学诊断技术,具有良好的推广应用前景。
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 S1蛋白 截短表达 活性鉴定 间接ELISA 检测
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天津地区辣椒病毒病调查及毒源种类初步鉴定
《山东农业科学 》 2016
摘要：本研究对天津5个区县辣椒病毒病的发生情况进行初步调查,并利用6种常见蔬菜病毒的抗体采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)鉴定采集到的228份病毒样品。结果表明,有186份样品呈阳性,黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)检出率最高,达42.25%,为天津地区辣椒的优势毒源种类;烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、番茄花叶病毒(Tomato mosaic virus,To MV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)、番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV)检出率分别为37.43%、28.34%、17.65%和20.86%;并首次在天津武清地区检出番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilf virus,TSWV)侵染辣椒。调查还发现天津地区辣椒存在2种及2种以上病毒复合侵染。
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