科研产出
狂犬病诊断基因芯片的建立和检测应用的初步研究
《中国预防兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：根据已发表的狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成能扩增高度保守核(N)蛋白片断的一对引物。通过生物素标记PCR技术,将核(N)蛋白基因片断作为探针点在硝酸素纤维膜上,制作成疾病诊断基因芯片。取160份可疑动物的血液,提取核酸作模板进行PCR扩增,将其产物与诊断基因芯片进行特异性逆向点杂交检测;并用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立检测RV抗体的间接ELISA。把以上两种方法应用于临床,结果基因芯片的检测率比ELISA方法和(RT)PCR要高15%左右,表明建立的狂犬病诊断基因芯片具有更高的灵敏度和特异性。
关键词： 狂犬病病毒 基因芯片 间接ELISA (RT)PCR
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2,4-D人工抗原合成及2,4-D类农药特异性多克隆抗体的研制
《农业环境科学学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：通过改良EDC法,将2,4-DB、2,4-D分别与载体蛋白(BSA、OVA)偶联合成了2,4-D的免疫原2,4-DB-BSA、2,4-D-BSA和包被原2,4-DB-OVA、2,4-D-OVA。免疫抗原测定结果表明,所得紫外吸收光谱,具有载体蛋白BSA和半抗原2,4-DB或2,4-D的特性,最大吸收峰为282nm。合成2,4-DB-BSA、2,4-D-BSA免疫抗原的结合比分别为1∶24、1∶20,合成的2,4-DB-OVA、2,4-D-OVA包被原的结合比分别为1∶10、1∶8。上述两种免疫原分别免疫新西兰白雄兔,获得2,4-D类农药多克隆抗体。其中免疫2,4-DB-BSA的两只兔PBD1和PBD2的效价较高,分别是1∶102400和1∶51200。选择效价较高的PBD1多克隆抗体进一步优化筛选出抗原抗体的工作浓度,2,4-D-OVA包被原3μg·mL-1,PBD1多克隆抗体1∶12800。经测定,该多克隆抗体对目标检测物2,4-D、2,4-Dbutylester敏感度较高,抑制中浓度(I50)、检测限(I20)分别为,2,4-D:179.8ng·mL-1,1.09ng·mL-1;2,4-Dbutylester:3010.0ng·mL-1,1.53ng·mL-1。对2,4-D识别的特异性也较强。另外测定了制备2,4-D多克隆抗体对几种2,4-D类似结构化合物交叉特异性反应,2,4-DB最强,2,4-D次之,之后依次为2,4-D丁酯、2,4-D异丙酯,交叉反应性较差的有2甲4氯、2,4,5-涕、2,4-滴丙酸。
关键词： 2,4-D 半抗原 免疫抗原 酶联免疫吸附测定(ELISA) 抗体
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狂犬病病毒低密度基因芯片的建立及其与常规检测方法的比较研究
《江苏农业科学 》 2007 北大核心
摘要：根据已发表狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成扩增高度保守核(N)蛋白片断的引物。通过生物素标记的RT-PCR技术和微量点样技术,将高度保守N蛋白基因片段作为探针点,在硝酸纤维素膜上制成16点阵的低密度诊断基因芯片。提取160份可疑犬的血液,以核酸作模板进行RT-PCR扩增,将其产物分别用琼脂糖凝胶电泳和低密度芯片检测;同时采用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立间接ELISA的检测方法。试验结果表明,RV低密度基因芯片的检测率比ELISA方法和RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,完全可以作为临床诊断的一种方法。
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鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制
《中国预防兽医学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：以反复冻融、氯仿处理、滤膜过滤、PEG反透析浓缩和分子筛层析的方法纯化DHV免疫BALB/c小鼠,同时作为包被抗原建立了筛选抗DHV阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经特异性和重复性试验,效果良好。经一系列融合、筛选,成功获得阳性杂交瘤细胞株4株,并制备出了腹水,分别命名为2B5、2E8、5E6和6C11。特性鉴定结果表明4株单抗ELISA效价均比较高且特异性好,中和特性稍差,和两株Ⅰ型标准毒以及在山东分离到的几株病毒均有交叉反应。
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一个侵染山东大葱的胡葱黄条病毒分离物的鉴定
《病毒学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：在山东章丘大葱上发现了一种引起畸形黄条症状的线状病毒。该病毒容易摩擦接种侵染大葱和胡葱,但不侵染其它22种测试植物,能经由豌豆蚜传播。病毒粒子形态和细胞病理特征具有马铃薯Y病毒科成员的典型特征。Western blot分析表明,提纯病毒制备的抗血清能与病毒自身外壳蛋白起特异性的强反应,与薤花叶病毒、晚香玉轻斑驳病毒、小西葫芦黄花叶病毒和芋花叶病毒外壳蛋白有较弱的反应。采用马铃薯Y病毒科简并引物PCR技术扩增了该病毒的基因组3′-末端部分序列,序列比较表明它为胡葱黄条病毒(SYSV),系统进化树分析表明世界范围内的SYSV分离物可以区分为4个主要群体,在一定程度上与寄主植物种类及地理分布相关。
关键词： 胡葱黄条病毒 普通生物学鉴定 血清学 核苷酸序列 系统进化树分析
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茶叶中硫丹及硫丹硫酸酯的ELISA快速测定
《茶叶科学 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：研究应用酶联免疫方法,快速检测茶叶中硫丹及硫丹硫酸酯。茶叶提取后,不净化,用PBS缓冲液稀释500倍后,进行酶联免疫方法测定,方法平均回收率为86.6%~91.1%;经SPE净化后,回收率68.7%~123%。标准曲线IC50为2μg/L,线性范围1~10μg/L。直接提取法最低检测限2mg/kg,净化法为0.06mg/kg。经气相色谱/质谱联用方法验证,灵敏度、精密度和准确度均符合快速检测要求。该法具有快速、简便、低耗、易操作等特点。
关键词： 硫丹 酶联免疫 茶叶 气相色谱/质谱联用仪
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小麦指纹图谱数据库的建立及SSR分子标记试剂盒的研发
《作物学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：本研究以国际玉米小麦改良中心(CIMMYT)、国际干旱地区农业研究中心(ICARDA)、法国Agropolis研究所和中国农业科学院作物科学研究所提供的数据为基础,建立了包括134个SSR引物、2457个普通小麦基因型的指纹图谱数据库。利用荧光标记法的分析结果,用代表性基因型在某一位点的扩增片段作为银染法的读带依据,开发了SSR分子标记试剂盒,包括46对SSR引物及其PCR反应程序、代表性基因型的DNA样品、592个等位变异的代表性基因型清单及试剂盒使用说明等。该数据库的建立和试剂盒的开发,为利用SSR分子标记技术进行小麦种质遗传多样性研究,实现小麦遗传资源和信息资源全球共享提供了重要工具和技术平台。
H_5亚型禽流感单克隆抗体的研制及应用
《家禽科学 》 2005
摘要：以禽流感H5亚型病毒分别免疫BABL/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)和间接ELISA检测细胞上清液,结果获得了3株抗禽流感H5亚型病毒特异性单克隆抗体,分别命名为1B6,1D4,7D1;其中1D4株为抗禽流感H5亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株,1B6株和7D1株为针对禽流感病毒NP蛋白的单克隆抗体细胞株。经3次亚克隆后,100%杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒抗体的能力。这些单克隆抗体小鼠腹水ELISA效价为105,HI效价为211￣12。研究结果表明,所有这些单克隆抗体仅与相应的禽流感病毒株发生特异性反应,而不与鸡新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、鹅副粘病毒等反应。所有这些单抗在禽流感诊断中将发挥重要作用。
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