科研产出
牛副流感病毒3型抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用
《动物医学进展 》 2016 北大核心
摘要：旨在建立牛副流感病毒3型(BPIV3)抗体间接ELISA检测方法。克隆NP-HN截短串联基因并构建原核表达载体pET28a(+)-NP-HN,诱导纯化NP-HN重组蛋白作为包被抗原,优化ELISA反应条件,建立BPIV3抗体间接ELISA检测方法,进一步与病毒中和试验和进口ELISA试剂盒进行比较,应用本方法对270份临床血清样本进行了检测。结果表明,表达的NP-HN重组蛋白大小为44ku,具有良好的反应原性,建立的ELISA检测方法特异性强,与牛的主要呼吸道病原如牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒等均无交叉反应,批内和批间重复性试验的变异系数小于8%,与病毒中和试验和进口商品化ELISA试剂盒的总符合率分别为96.67%和98.89%。对采自山东、辽宁和天津的270份临床血清样本检测后总的阳性率为82.59%(223/270)。建立的BPIV3抗体间接ELISA方法具有较好的特异性和敏感性,可应用于BPIV3的流行病学调查和抗体检测研究。
关键词： 牛副流感病毒3型 NP-HN基因 原核表达 酶联免疫吸附试验 抗体检测
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山东省规模化猪场四种病毒性疾病的抗体检测
《家畜生态学报 》 2016 北大核心
摘要：为及时了解山东省规模化猪场重大病毒性疾病的抗体水平,试验采用进口ELISA试剂盒,分别对山东省不同地区7个规模化猪场分别送检的共224份血清进行猪瘟病毒、猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病毒及猪圆环病毒的抗体检测。结果显示:7个规模化猪场猪瘟、猪蓝耳病、猪圆环病毒病的抗体阳性率分别在20.00%~87.50%、5.00%~93.10%、38.89%~100.00%之间;猪伪狂犬病野毒感染率为0.00%~88.89%,经SPSS 19.0软件分析知7个不同猪场之间各种疾病的抗体阳性率均存在显著差异性(P<0.05)。根据以上数据对猪场四种病毒性疾病的抗体水平进行分析,为制定完善的免疫防控方案提供重要的依据。
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猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5抗体检测ELISA在中和抗体评估中潜在应用的研究
《中国预防兽医学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为评估猪群血清中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)中和抗体水平,本研究以原核表达的重组HP-PRRSV GP5蛋白为包被抗原,通过对反应条件进行优化,建立了检测GP5抗体的间接ELISA(r GP5-ELISA)。结果显示该方法与猪圆环病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、细小病毒、日本乙型脑炎病毒阳性血清均无交叉反应,具有良好的特异性。重复性试验结果显示,组内组间变异系数均小于5.3%。应用建立的r GP5-ELISA方法和IDEXX-ELISA对288份临床血清样品进行检测,结果显示两种方法具有较低的相关性(R=0.831)。中和试验(SN)结果显示,r GP5-ELISA检出阳性血清的中和效价显著高于IDEXX-ELISA(p<0.01)。Western blot复检r GP5-ELISA检测呈阴性的65份猪血清样品,其中58份呈阴性、7份为阳性;而IDEXX-ELISA检测则该65份血清全部呈阳性。对比SN和western blot试验,r GP5-ELISA比商品化IDEXX-ELISA具有更高的SN抗体符合率,因而其检测结果能够更好地反映猪群血清中和抗体水平。本研究建立的方法可以用于大规模猪群PRRSV中和抗体水平评估,并为PRRS流行病学调查提供了技术支持。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 囊膜糖蛋白5 间接ELISA 中和抗体水平评估
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规模化奶牛养殖场布鲁氏菌病血清学调查
《中国农学通报 》 2014 CSCD
摘要：为了对中国奶牛群进行布鲁氏菌病的血清学调查,实验室拟定采用虎红平板凝集试验进行调查,自2011年1月—2013年6月,实验室收到送检和采集的全国范围内的规模化奶牛养殖场血样样本进行虎红平板凝集实验,对养殖场大群和流产奶牛进行初步的筛查。结果表明:虎红检测奶牛血清样本共计5575份,阳性血清1036份,占检测样本总数的18.58%。其中,群检奶牛血清样本4980份,阳性样本792份,虎红阳性率为15.90%;流产奶牛血清样本595份,阳性样本244份,虎红阳性率为41.01%。结果显示:全国范围内,布鲁氏菌病的发病情况比较严重,而且范围很广,呈现上升趋势,布鲁氏菌病引起的奶牛流产,在各种流产因素中占据很大比例。
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牛布鲁氏菌毒力基因Virb8间接ELISA检测方法的建立与应用
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】布鲁氏菌virb8蛋白是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究拟构建含布鲁氏菌Virb8基因的原核表达载体,利用纯化蛋白作为包被抗原,建立检测牛布鲁氏菌血清抗体的间接ELISA方法(iELISA)。【方法】根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌Virb8序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增Virb8的基因,将目的基因克隆入PEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Virb8,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-Virb8,经SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定后,采用Ni-NTA Spin Kit纯化目的蛋白,利用所建立的iELISA方法对235个临床奶牛血清样本进行检测,并与虎红平板凝集实验进行比较。【结果】成功构建了含Virb8的表达载体,经多次对表达条件的优化,大量表达了目的蛋白,建立的iELISA方法具有稳定、灵敏的特点,与虎红平板凝集试验的符合率可达97.02%。【结论】所建立的iELISA方法是一种有效的牛布鲁氏菌病血清学诊断的方法,为进一步研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。
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鸭坦布苏病毒E基因的克隆表达及初步应用
《浙江农业学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：利用PCR方法从鸭坦布苏病毒山东分离株(BZ株)扩增整个E基因,全长1 503 bp,克隆到pMD18-T载体中,然后将双酶切目的片段亚克隆入pET-28a(+)载体,构建出重组表达质粒PET28a-E。将PET28a-E转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导可表达出分子量约54.8 kD的蛋白,Western blotting试验呈阳性,表明E蛋白有很好的反应原性。以纯化的表达产物作为包被抗原,鸭坦布苏病毒血清为一抗,HRP标记的羊抗鸭IgG为二抗建立间接ELISA方法。采用该方法对80份送检鸭血清进行检测,并与中和试验进行比较,结果显示,两者的符合率为95.0%,表明该方法具有较好的应用前景。
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转Bt基因玉米叶片中Bt蛋白的表达和分泌研究
《山东农业科学 》 2012
摘要：以转Bt玉米Mon810及其亲本非转基因玉米为研究对象,通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)定量检测Mon810玉米叶中Bt蛋白表达量和叶表Bt蛋白分泌量,结果表明叶组织和叶表均可检测到Bt蛋白,组织内Bt蛋白量从苗期到抽丝期随着植株营养生长的加快呈上升趋势,至抽丝期达到顶峰,之后逐渐降低;叶表Bt蛋白分泌量变化无明显规律性。
关键词： 酶联免疫吸附测定法(ELISA) 转基因玉米 Bt蛋白
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鸭坦布苏病毒包膜蛋白的原核表达和间接ELISA抗体检测方法的建立
《动物医学进展 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为建立特异性和敏感性高的检测鸭坦布苏病毒感染的方法,采用原核表达系统对鸭坦布苏病毒(DTMUV)E基因进行了克隆与表达,SDS-PAGE电泳结果显示融合蛋白大小为54.3ku。Western blot结果表明,经亲和层析法纯化后的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组E蛋白作为包被抗原,初步建立了检测E蛋白抗体的间接ELISA方法。对ELISA各种反应条件进行了优化,确定了最适工作条件。优化后确定的抗原最适包被浓度为7μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶320,酶标抗体最适稀释度为1∶1 000。在优化条件下,阴性和阳性临界值判定标准为0.324 4。本研究建立的快速检测DT-MUV抗体的间接ELISA方法为该病的检测和流行病学调查提供了技术手段。
关键词： 鸭坦布苏病毒 包膜蛋白 原核表达 间接酶联免疫吸附试验
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