科研产出
酶联免疫吸附法快速检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
《农产品加工(学刊) 》 2011
摘要：应用ELISA法快速检测麦类、谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为10μg/L,检测范围为10-1 000μg/L。用10%甲醇水溶液提取含DON的小麦及玉米样品,回收率为86～93%,变异系数为4.1%～17.4%。
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禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的研制和鉴定
《江西农业学报 》 2010
摘要：应用杂交瘤技术,以低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株作为免疫原,制备出3株稳定分泌特异性单克隆抗体的细胞株C2C5、D3B10和C2H8。对单抗的特异性鉴定结果表明:腹水单抗C2C5、D3B10和C2H8的间接ELISA效价分别为5×214、210、5×212,但均无HI效价。3株单抗的免疫球蛋白亚类均为IgG2a。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示:单抗C2H8和D3B10与AIV H9N2和AIV H5N1均有60 kD的蛋白条带反应,而不与其他条带反应,表明这两株单抗特异性地针对AIV H9和AIV H5的共同抗原成分60 kD NP蛋白。而C2C5不与电泳蛋白条带反应,说明该单抗不是针对线性表位的,而可能是针对空间表位的。
关键词： 禽流感 单克隆抗体 间接ELISA HI试验 共同抗原
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PCB77人工抗原的合成及多克隆抗体的制备
《细胞与分子免疫学杂志 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：目的:制备PCB77人工抗原和多克隆抗体,为建立其免疫学检测方法提供技术准备。方法:以3,4-二氯苯基乙酸为半抗原,在低温和弱碱性条件下,采用N-羟基琥珀酰亚胺活性酯法将其与载体BSA偶联,制备PCB77的人工抗原,计算结合比为23∶1,免疫家兔获得了PCB77的多克隆抗体。采用混合酸酐法将半抗原与OVA偶联,结合比为8∶1,用作ELISA检测包被原。间接ELISA检测结果表明,2只兔子的抗血清效价均达1∶20 000以上。抗血清经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后通过ELISA检测验证了PCB77人工抗原的有效性,通过方阵滴定法确定ELISA的最佳工作浓度,建立标准曲线。在0.75~300 ng/L范围内,抑制率与PCB77的质量浓度对数呈显著的线性关系,检测限达到4.44μg/L。结论:合成的PCB77人工抗原具有较好的免疫效果,纯化后的抗体符合后续实验的条件要求,为研制和开发PCB77免疫检测试剂盒奠定了基础。
关键词： 3,4二-氯苯基乙酸 偶联率 人工抗原 多克隆抗体 ELISA
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禽流感病毒单克隆抗体的研制
《家畜生态学报 》 2010
摘要：用低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株全病毒作为抗原,制备能够用于建立ELISA检测AIV的特异性单抗;以间接ELISA和HI试验筛选出阳性克隆,并经有限稀释法三次亚克隆之后,共获得三株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,在Dot-ELISA试验中三株单抗中的两株与13个AIVH9N2国内分离株、4个AIV H5N1国内分离株都反应,而与10个NDV国内分离株,IBV、IB-DV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应。一株与13个AIV H9N2国内分离株反应,与4个AIV H5N1分离株、NDV、IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应。
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重组N蛋白抗原检测美洲型PRRSV抗体间接ELISA方法的建立
《中国动物检疫 》 2010
摘要：利用表达纯化的PRRSV特异N蛋白抗原表位基因的重组融合蛋白作为抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。研究结果表明重组N蛋白的最适包被浓度为4.5μg/mL,最适包被条件为37℃1 h加4℃过夜,待检血清稀释度为1:40,HRP-兔抗猪IgG(1:1000)37℃孵育30min。经重复性试验、交叉试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高,与武汉科前ELISA试剂盒的符合率达93.2%。用已建立的方法检测2007年以前临床血清样本983份,总阳性率为48.6%。
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检测牛轮状病毒抗体间接ELISA方法的建立
《中国预防兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用CsCl密度梯度离心纯化的牛轮状病毒作为包被抗原,建立了检测牛轮状病毒抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。用牛病毒性腹泻病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌制备的对照包被抗原与牛轮状病毒阴性和阳性血清反应,其结果均无交叉反应,说明该方法具有良好的特异性,可用于牛轮状病毒抗体的检测。
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利用ELISA方法鉴定大白菜TuMV抗性
《科技导报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了准确鉴定大白菜分离群体中各个单株的TuMV抗/感特性,采用美国Agdia公司的TuMV检测试剂盒,利用ELISA方法,对接种后的抗、感材料和F2代单株进行检测。结果表明,对抗病材料和感病材料,ELISA检测结果与其抗性表现基本一致,能明显区分出抗病和感病。但对发病较为严重的高感病毒病材料,ELISA检测结果却为阴性。绝大多数F2代的ELISA检测结果能够说明各个单株的抗/感特性。利用ELISA方法还能对某些单株的抗/感特性进行提前预测。因此,ELISA方法可作为大白菜TuMV抗病性鉴定的有利辅助手段。
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山东省沙地葡萄茎痘相关病毒的检测
《果树学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为明确沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)在山东省发生的情况,2006-2007年在葡萄主栽区和葡萄品种资源圃进行了田间调查、样品采集和病原检测。应用GRSPaV外壳蛋白基因表达获得的多克隆抗体,经间接酶联免疫吸附试验(PTA-ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测,在2a采集的298个样品中,125个样品为阳性反应,阳性率41.95%。125个阳性样品涉及43个品种,品种被侵染率74.14%。研究对检测的样品用RT-PCR法验证,有3对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340bp片段、外壳蛋白(CP)基因842bp片段和RNA聚合酶(RdRp)基因499bp片段。
关键词： 葡萄茎痘相关病毒 病原检测 ELISA RT-PCR
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封闭液对ELISA检测蓖麻毒素的影响
《吉林农业科学 》 2008 CSCD
摘要：通过对30种封闭液与3种封闭条件对ELISA检测蓖麻毒素方法的封闭条件进行了优化,由P/N值得到1%酪蛋白+5%脱脂乳与5%脱脂乳+2%PEG 2万两种封闭剂在包被后孵育一次的封闭效果相似,也是所有组合中封闭效果最好的,从而大大提高了ELISA检测蓖麻毒素的敏感性和特异性。
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