科研产出
纳米疫苗在禽流感防控中的研究进展
《中国畜牧兽医 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：禽流感病毒（Avian influenza virus, AIV）因其具有变异性强、亚型种类多、感染宿主多样性等特点，对畜牧业发展及公共卫生安全具有巨大的影响。目前，传统灭活疫苗在预防禽流感中虽起着重要作用，但仍存在免疫失败、多次接种及易出现不良反应等弊端，因此，研制新型疫苗来弥补传统疫苗的不足非常有必要。纳米颗粒疫苗具有包裹性好、结构稳定、靶向性高和免疫原性强等优点，可作为新型流感病毒疫苗的候选。笔者首先介绍了禽流感难以防控的原因及纳米疫苗的特点，然后对病毒样颗粒疫苗、自组装蛋白疫苗、聚合物纳米颗粒疫苗、无机纳米颗粒疫苗及纳米颗粒的毒性机制方面进行综述，概述了近年来AIV纳米颗粒疫苗的研究进展，并简述了采用不同抗原、不同纳米材料及不同给药方式对免疫效果的影响，结合目前纳米疫苗的研究，预测了未来纳米颗粒疫苗可作为AIV防控的一种新途径，对禽流感纳米疫苗在兽医临床的应用前景进行了分析和展望。
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免疫增强剂CpG DNA重组质粒对不同日龄SPF鸡H9亚型禽流感灭活疫苗免疫效应的影响
《中国动物检疫 》 2022
摘要：为分析CpG基序寡聚脱氧核苷酸(CpG DNA)对H9亚型禽流感病毒(AIV-H9)灭活疫苗的免疫增强作用,利用商品化的含有CpG DNA的重组质粒作为AIV-H9灭活抗原的免疫佐剂,经肌内注射1、7、21日龄的SPF鸡,通过检测鸡血清中HI抗体和外周血淋巴细胞CD4、CD8基因相对表达量,分析CpG DNA重组质粒对不同日龄SPF雏鸡首次免疫AIV-H9灭活疫苗免疫效果的影响.结果显示:1、7和21日龄SPF鸡首免后,CpG DNA免疫增强剂添加组的HI抗体滴度明显高于未添加组(P≤0.05),HI抗体峰值滴度升高了近2log2滴度,差异极显著(P≤0.01),且上升速度更快;CpG DNA免疫增强剂添加组,在21日龄免疫时的免疫效果明显优于1日龄和7日龄免疫组,表现为HI抗体上升速度更快,峰值更高,离散度更小;首免3周后,7日龄和21日龄SPF鸡CpG DNA免疫增强剂添加组的CD4、CD8基因相对表达量均高于同日龄未添加组,且明显高于1日龄SPF鸡组(P≤0.01).结果表明,CpG DNA能显著增强鸡对AIV-H9灭活疫苗的特异性体液免疫反应,可以作为高效的免疫增强剂,尤其在21日龄使用时免疫效果更好.本研究为CpG DNA重组质粒在禽流感疫苗上的联合应用以及研制新型复合佐剂疫苗提供了依据.
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聚肌胞对禽流感油乳剂疫苗的体液免疫增强作用研究
《山东农业科学 》 2017
摘要：为了研究聚肌胞是否能够增强油乳剂灭活疫苗免疫后鸡群的体液免疫应答,将3个不同来源的聚肌胞产品与H5亚型禽流感病毒灭活抗原相混合,使用轻质矿物油乳化制备疫苗,分别免疫21日龄SPF鸡,同时设置添加抗菌肽的疫苗免疫组、常规油乳剂疫苗免疫组以及不免疫对照组。在免疫后第14、21、28、35 d分别翅下静脉采集SPF鸡抗凝血,通过血凝抑制试验检测鸡血清中禽流感抗体的水平,使用统计学方法评价疫苗中添加聚肌胞对鸡群体液免疫反应的影响。结果发现,添加了聚肌胞或抗菌肽的疫苗免疫后,鸡血清中禽流感抗体水平显著高于普通油苗组。另外,不同来源的聚肌胞产品(PIC-1、PIC-2和PIC-3)免疫增强作用存在差异,以PIC-1免疫增强效果最好。在PIC-1疫苗免疫后,鸡血清抗体增长快,且可维持较高水平。总之,本研究表明聚肌胞是良好的禽病毒性疫苗免疫增强剂;不同厂家的聚肌胞产品质量有差异,应择优使用。
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一株鹅源H9N2亚型流感病毒的分离鉴定及其HA基因的遗传进化分析
《山东农业科学 》 2016
摘要：2014年从山东省某鹅场发病鹅体内分离到一株具有血凝性的病毒,对其进行鉴定,并对其HA基因和NA基因进行克隆测序,分析了解其与其他H9N2各毒株间的变异关系和进化规律。结果表明:经HI交叉抑制试验和基因克隆最终证实该毒株为H9N2亚型流感病毒,将其命名为A/goose/Shandong/XJ/2014(H9N2),简称XJ。XJ分离毒株的HA基因裂解位点序列为PSRSSRGLF,为弱毒毒株的特征序列。其HA基因与其他参考株HA基因的核苷酸序列同源性为87.2%~99.9%,氨基酸序列同源性为87.4%~99.8%。XJ与国内大部分同期分离毒株遗传距离较近,尤其是2013年以后的分离毒株。
关键词： 禽流感 H9N2亚型流感病毒 HA基因 遗传进化
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T细胞表位多肽疫苗对禽流感病毒的免疫保护评价
《山东农业科学 》 2016
摘要：为了探究NP蛋白T细胞表位多肽NP_(67-74)-KLH对流感通用疫苗4M2e-MAP免疫效果的影响,本研究将多肽NP_(67-74)-KLH和4M2e-MAP添加完全弗氏佐剂和不完全弗氏佐剂后免疫BALB/c小鼠,通过攻毒保护试验来评价免疫效果。攻毒以后小鼠体重变化曲线说明,联合免疫多肽疫苗NP_(67-74)-KLH和4M2e-MAP的试验组小鼠体重变化趋势比单一免疫4M2e-MAP合成肽疫苗更加趋于平稳,并且联合免疫试验组小鼠体重恢复较快。荧光定量和肺部组织病理切片结果均表明,复合多肽(NP_(67-74)-KLH和4M2eMAP)能在一定程度上干扰流感病毒在脏器肺中的复制并能够降低病毒对肺部的损伤程度,在抵抗病毒过程中可以产生有效保护。该研究为多肽疫苗联合应用以抵抗流感研发提供了较好思路。
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近20年中国部分地区鸡源H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传演化及其变异频率
《微生物学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过比较不同时期的H9N2亚型禽流感流行毒株HA基因的分子特征和变异频率,揭示免疫压力下病毒的遗传演化趋势。【方法】选取源于课题组的40株鸡源H9N2毒株,以及从Gen Bank下载的136株中国鸡源H9N2流行毒株和7株经典毒株的序列,利用Lasergen 7.1和MEGA 5.1等软件,对其HA基因进行系统演化、分子特征和变异频率分析。【结果】系统发育分析表明,近20年的鸡源H9N2流行株分属于BJ94、Y280和S2等谱系,优势流行株的分布与年代密切相关。氨基酸序列比较显示,H9N2病毒不同谱系之间具有各自的特征,且存在着明显的氨基酸变异积累。以Ck/BJ/1/1994 HA基因为参照,1994–2014年间,H9N2流行株核苷酸和氨基酸的年均进化率分别为5.73×10~(–3)和4.25×10~(–3)。其中,2011–2014年的核苷酸(氨基酸)年均进化率为6.35×10~(–3)(5.32×10~(–3)),明显高于2006–2010年5.22×10~(–3)(3.70×10~(–3)),更显著高于疫苗推广初期1999–2005年的0.74×10~(–3)(0.50×10~(–3))。【结论】H9N2疫苗株和流行毒株的不匹配是病毒变异频率加快的重要原因。
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外源性新城疫和禽流感抗体在SPF鸡体内的动态消长规律
《家禽科学 》 2013
摘要：选取2月龄SPF鸡100只,随机分组,分别设接种(肌注和口服)、攻毒保护和对照(正常和发病)组。检测SPF鸡接种不同接种途径、时间等血清中新城疫(Newcastle disease virus,NDV)和禽流感(Avian influenza virus,AIV)不同亚型(H5、H9N2)抗体滴度的变化,进而探讨不同抗体在体内的消长规律。结果表明:肌肉注射组的ND、H5(RE-4和RE-6)和H9N2抗体在注射后14d内,每天的抗体水平均显著高于对照组(P<0.01),且注射后抗体滴度在24h内达到峰值,高水平抗体至少可维持5d。口服抗体效果较差。动物攻毒试验表明,抗体对NDV具有较好的保护效果。
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禽流感病毒NP蛋白单克隆抗体的研制和鉴定
《江西农业学报 》 2010
摘要：应用杂交瘤技术,以低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株作为免疫原,制备出3株稳定分泌特异性单克隆抗体的细胞株C2C5、D3B10和C2H8。对单抗的特异性鉴定结果表明:腹水单抗C2C5、D3B10和C2H8的间接ELISA效价分别为5×214、210、5×212,但均无HI效价。3株单抗的免疫球蛋白亚类均为IgG2a。SDS-PAGE和Western-blot分析结果显示:单抗C2H8和D3B10与AIV H9N2和AIV H5N1均有60 kD的蛋白条带反应,而不与其他条带反应,表明这两株单抗特异性地针对AIV H9和AIV H5的共同抗原成分60 kD NP蛋白。而C2C5不与电泳蛋白条带反应,说明该单抗不是针对线性表位的,而可能是针对空间表位的。
关键词： 禽流感 单克隆抗体 间接ELISA HI试验 共同抗原
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禽流感病毒单克隆抗体的研制
《家畜生态学报 》 2010
摘要：用低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株全病毒作为抗原,制备能够用于建立ELISA检测AIV的特异性单抗;以间接ELISA和HI试验筛选出阳性克隆,并经有限稀释法三次亚克隆之后,共获得三株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,在Dot-ELISA试验中三株单抗中的两株与13个AIVH9N2国内分离株、4个AIV H5N1国内分离株都反应,而与10个NDV国内分离株,IBV、IB-DV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应。一株与13个AIV H9N2国内分离株反应,与4个AIV H5N1分离株、NDV、IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应。
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家禽密切接触人群禽流感和新城疫血清学调查
《浙江农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：为了评估家禽密切接触人群感染新城疫和禽流感病毒的风险,分别采集21份规模化养禽场和20份从事禽产品加工的屠宰场工作人员血清样品,采用微量中和试验检测人血清样品中新城疫和禽流感(H5和H9亚型)病毒抗体。结果发现,养禽场工作人员新城疫病毒抗体阳性率为33.3%,禽流感(H5和H9亚型)病毒抗体均为阴性;屠宰场工作人员新城疫病毒抗体阳性率为5%,禽流感(H5和H9亚型)病毒抗体均为阴性。结果表明新城疫病毒能够感染人,而目前国内流行的禽流感病毒感染人群的可能性较小。但是,由于禽流感病毒很容易发生变异和持续进化,有必要对家禽密切接触人群进行血清学监测。
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