科研产出
不同白油佐剂制备的H9N2灭活疫苗在SPF鸡上的免疫效果初试验
《山东畜牧兽医 》 2018
摘要：为了比较不同厂家的注射用矿物白油佐剂的免疫效果,试验采用3个不同黏度的国外白油样品,按照《中华人民共和国兽药典》进行注射用白油质量检验、制备3批H9N2油乳剂灭活疫苗,分别以0.3ml/只剂量,胸部肌肉注射接种28日龄SPF鸡,接种后14d、21d、28d、35d、42d分别进行疫苗的药物残留吸收检查和血清抗体效价检测。结果表明:3种佐剂疫苗的安全性、稳定性均良好;应用WG40白油佐剂的灭活疫苗,免疫SPF鸡产生的H9N2禽流感HI抗体水平优于其它两种佐剂,免疫3周后检测到的H9N2禽流感抗体水平均合格,WG40确定为最佳白油佐剂。
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2016年山东地区10株H_9N_2亚型禽流感病毒HA基因的遗传演化分析
《家禽科学 》 2018
摘要：为了解2016年山东地区H_9N_2亚型禽流感病毒的变异情况,选取2016年所分离的10个H9N2亚型禽流感病毒株,对其HA基因进行测序,并应用DNAStar和Mega5.0生物软件拼接序列和建立进化树。结果表明,10株H_9N_2分离毒的HA裂解位点氨基酸均为-RSSR/GLF-,有6~8个潜在的糖基化位点,具有典型低致病性禽流感病毒HA基因的特征,但其226位氨基酸均为亮氨酸(L),呈现出人流感受体结合特性。进化树分析表明,2016年山东地区H_9N_2流行毒株HA基因属于A/Duck/Hong-Kong/Y280/97亚群,同属于近几年在中国鸡群中流行的以A/chicken/Zhejiang/HJ/2007为代表的G57分支。
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近20年中国部分地区鸡源H9N2亚型禽流感病毒HA基因遗传演化及其变异频率
《微生物学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过比较不同时期的H9N2亚型禽流感流行毒株HA基因的分子特征和变异频率,揭示免疫压力下病毒的遗传演化趋势。【方法】选取源于课题组的40株鸡源H9N2毒株,以及从Gen Bank下载的136株中国鸡源H9N2流行毒株和7株经典毒株的序列,利用Lasergen 7.1和MEGA 5.1等软件,对其HA基因进行系统演化、分子特征和变异频率分析。【结果】系统发育分析表明,近20年的鸡源H9N2流行株分属于BJ94、Y280和S2等谱系,优势流行株的分布与年代密切相关。氨基酸序列比较显示,H9N2病毒不同谱系之间具有各自的特征,且存在着明显的氨基酸变异积累。以Ck/BJ/1/1994 HA基因为参照,1994–2014年间,H9N2流行株核苷酸和氨基酸的年均进化率分别为5.73×10~(–3)和4.25×10~(–3)。其中,2011–2014年的核苷酸(氨基酸)年均进化率为6.35×10~(–3)(5.32×10~(–3)),明显高于2006–2010年5.22×10~(–3)(3.70×10~(–3)),更显著高于疫苗推广初期1999–2005年的0.74×10~(–3)(0.50×10~(–3))。【结论】H9N2疫苗株和流行毒株的不匹配是病毒变异频率加快的重要原因。
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MDCK细胞ISG15基因的克隆表达及抗病毒活性分析
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为了解ISG15基因体外抗病毒机制,应用RT-PCR方法扩增了MDCK细胞的ISG15基因,经测序分析,该基因序列与Gen Bank中登录的犬属ISG15基因序列相似性为99%。将该基因亚克隆至p ET-28a载体构建出重组原核表达质粒p28a-M15;工程菌p28a-M15/BL21经IPTG诱导表达,获得了约22 k D的重组目的蛋白,重组蛋白经Ni2+柱层析纯化。于H9N2亚型禽流感病毒S2株感染前后在MDCK细胞中定量加入纯化的ISG15蛋白,结果显示,病毒感染MDCK细胞前加入ISG15蛋白可以抑制病毒的复制,但病毒感染后添加该蛋白则促进了病毒的复制。
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1999～2013年山东H9N2亚型禽流感病毒HA基因的演化和HI抗原性差异分析
《中国科学:生命科学 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：利用生物信息学方法和血凝交叉抑制(HI)试验比较研究了山东地区低致病性禽流感H9N2亚型病毒的分子遗传变异和抗原性变化.对1999~2013年在山东地区分离并鉴定的35株H9N2病毒进行了HA基因测序和同源性分析,绘制了系统发育树.同源性比较显示,同一时期的毒株同源性较高,而不同年代的H9N2流行毒相差较大,如2010~2013年的H9N2流行毒之间核苷酸(氨基酸)同源性为94.5%~100%(96.1%~100%),但与疫苗株SD-6的核苷酸(氨基酸)同源性已降至90.0%~92.5%(91.8%~95.0%).系统发育树显示,35株H9N2病毒均属欧亚谱系,其中28株属于S2-like亚群,表明该类型毒株是山东地区最主要的流行株.重要氨基酸位点分析表明,2010年以后的H9N2流行毒,其HA蛋白裂解位点基序为PSRSSR↓GL,334位点均由原来的A变为S;与受体结合位点相关的234位点,则由Q变为L.选择不同亚群的H9N2代表毒株制备单因子血清,进行HI交叉抑制实验,结果发现,H9N2不同毒株之间均可发生一定的交叉反应,但相关指数最低已降至0.31,表明病毒已出现明显的抗原性变化.本研究证实,山东H9N2亚型禽流感病毒在分子和抗原水平上均已发生一定程度的变异.
关键词： H9N2 HA基因 系谱分群 HI交叉抑制 相关性
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