科研产出
猪流行性腹泻病毒变异株分离鉴定及攻毒模型建立
《生物学杂志 》 2023 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种急性高度接触性肠道传染病。研究成功分离到一株PEDV,命名为PEDV-20200946。对该毒株的S基因进行测序分析，遗传进化树结果显示，该分离毒株属于G2亚群。通过Reed-Muench法测定该毒株毒价为106.1 TCID50/mL。通过动物回归试验进一步探究该分离毒株对仔猪的致病情况，将12头20日龄仔猪平均分为3组，分别为口服攻毒组、口服+肌注攻毒组和对照组。攻毒后观察临床症状，72 h后采集各组的粪便及发病猪的肠道进行RT-PCR检测和免疫组化分析。结果显示，口服+肌注组仔猪发病最快，口服攻毒组次之，对照未发病。剖检攻毒组仔猪可见其肠壁变薄、肠道膨胀，内含大量黄色液体。免疫组化试验显示，攻毒组猪小肠内可检测到大量PEDV阳性信号，而对照组未检测到。研究建立了PEDV-20200946毒株仔猪攻毒模型，为深入研究PEDV流行毒株的分子特性以及弱毒疫苗的开发奠定基础。
关键词： 猪流行性腹泻病毒 流行毒株 分离鉴定 攻毒模型 遗传进化树
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鸭肠炎沙门氏菌致病性差异研究
《家禽科学 》 2023
摘要：沙门氏菌是一种革兰氏阴性短杆菌,血清型众多,可引起各种动物的细菌感染.为探究鸭肠炎沙门氏菌的致病性差异,本试验从山东省三个地区采集50份疑似沙门氏菌感染样品,通过细菌分离及PCR扩增目的基因进行鉴定,后通过动物回归试验研究此次分离的沙门氏菌在雏鸭中产生的影响,并通过PCR扩增及Blast比对分析对所分离到的沙门氏菌进行分型.结果显示,从山东省三个地区采集的50份样品中共分离鉴定出5株沙门氏菌;动物回归试验结果显示:5组沙门氏菌中,第5组相较其他组别致死率最高,致死率高达87.5%,其次为2组、4组、3组、1组;通过Blast比对分析,确定分离到的5株菌均为肠炎型沙门氏菌.本试验为山东地区鸭肠炎沙门氏菌流行情况及致病性差异提供了部分理论依据和数据支持.
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2018~2021年传染性喉气管炎在山东商品肉鸡中的发生和防控
《家禽科学 》 2022
摘要：2018～2021年间，山东部分地区的商品肉鸡等陆续发生了278例传染性喉气管炎（InfectiousLaryngotracheitis,ILT）疑似病例。经实验室PCR检测和病原分离鉴定，初步确诊为传染性喉气管炎病毒（InfectiousLaryngotracheitisvirus,ILTV）。利用SPF鸡胚，进行绒毛尿囊膜接种，结果分离到23株ILTV。选取10株ILTV毒株，对其结构蛋白gB基因进行了测序，比较了其核苷酸同源性，绘制了系统发育树，揭示了ILTV分离株及其与疫苗株的关系。此外，本文还分析了疫苗免疫在防控过程中所起的关键作用，对于如何预防和控制ILT具有重要的指导意义。
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猪流行性腹泻病毒变异毒株的分离鉴定及遗传演化分析
《生物学杂志 》 2022 CSCD
摘要：猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起猪的一种急性高度接触性肠道传染病。为了解山东地区PEDV的遗传进化趋势，对2020—2021年收集的疑似猪流行性腹泻的临床病料进行RT-PCR检测。随后将处理好的病料上清液接种于Vero细胞进行PEDV病毒分离，并利用间接免疫荧光（IFA）进行验证，成功分离到一株PEDV毒株，命名为QH-202105。将分离株传代培养至第10代，提取RNA后进行扩增并全基因组测序，结合NCBI下载的参考序列对分离株的全基因组和S基因进行核苷酸同源性比对、系统发育树构建分析，结果显示，分离株与美国分离株USA/Colorado/2013核苷酸同源性最高，为99.1%,与CHM2013株同源性最低，为96.5%。经S基因氨基酸序列分析显示，分离株QH-202105在S基因的N端有60多处突变，两处氨基酸插入（包括第59～62位氨基酸的QGVN 4个氨基酸插入，第145位氨基酸N的插入）和两处氨基酸缺失（第115～118氨基酸的缺失，第167～168氨基酸的缺失）。进化树分析结果显示，分离毒株QH-202105为G2基因群，与CH/HNAY/2015和CH/ZJCX-1/2012亲缘关系最近，属同一进化分支。在此基础上，应用PROVEAN对QH-202105的S蛋白突变氨基酸进行功能预测，结果显示，在1 361处（G→C）被判定为“Deleterious”,可以推测此处的突变对病毒的侵袭力可能存在间接影响。研究结果可为我国PEDV变异株的流行情况及防控提供参考。
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山东省肉鸡养殖场大肠杆菌的分离鉴定及抗药性监测
《山东农业科学 》 2021
摘要：近年来,由于抗菌药物广泛应用于动物和人类疾病的治疗和预防,导致各种细菌对抗生素的抗性急剧增加,尤其是大肠杆菌的多重耐药性。为了解山东省肉鸡养殖场大肠杆菌的抗药性情况,本研究于2018—2019年从山东省3个规模化养鸡场采集123份新鲜粪便样品,对其进行大肠杆菌的分离和鉴定,并利用微量肉汤稀释法对大肠杆菌分离株进行药敏试验。结果显示,从123份新鲜粪便样品中共分离到123株大肠杆菌;全部分离株对多西环素耐药,对美罗培南敏感。大肠杆菌多重耐药率为99.2%,对9种抗生素耐药的菌株多达34株。本研究结果可为养鸡场中抗生素的规范使用提供理论依据。
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新型鸭呼肠孤病毒山东株的分离鉴定及致病性分析
《中国兽医杂志 》 2021 北大核心
摘要：本试验采用病毒分离培养、RT-PCR扩增、测序分析、致病性试验等方法,以探索山东菏泽地区商品肉鸭养殖场内樱桃谷鸭脾脏坏死、瘸腿症状的病因。结果显示,鸡胚培养发病鸭的肝脏和脾脏组织悬液分离出1株病毒;该病毒株S1基因与新型鸭呼肠孤病毒的同源性为94%～96%,与鹅呼肠孤病毒的同源性为95%,与番鸭呼肠孤病毒的同源性为49%～50%,与禽呼肠孤病毒同源性为44%～48%,从而确定该病毒株为新型鸭呼肠孤病毒;该病毒株经尿囊腔接种于7日龄SPF鸡胚后,胚体在72～96h内集中死亡,出现水肿、出血症状;该病毒株在Vero细胞上可产生明显的空泡化病变;该病毒株在1日龄雏鸭可回归出与临床一致的脾脏坏死,攻毒后第8周,可观察到50%的鸭发生瘸腿,同时肌肉和关节处可剖检到干酪样物。由此判断,新型鸭呼肠孤病毒感染是导致该养殖场鸭脾脏坏死和瘸腿的主要原因。
关键词： 新型鸭呼肠孤病毒 脾脏坏死 瘸腿 分离鉴定 RT-PCR
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鸭源致病性大肠杆菌的分离鉴定及辣木叶水提物抑菌效果分析
《家禽科学 》 2021
摘要：大肠杆菌病是严重危害养鸭业的一类细菌性疾病,临床上多使用抗生素治疗,但耐药菌株的增多使抗生素的治疗效果大大下降,同时带来食品安全隐患。因此,筛选安全、天然抑菌药物成为研究热点。本试验从疑患大肠杆菌病死鸭无菌采集病料,分离出1株细菌,并对分离的细菌进行形态特征、生化试验、药敏试验、16S rDNA遗传分析,最终判定该分离菌为大肠杆菌。随后,选用本实验室提取的辣木叶水提物（MLHE）进行体外试验验证抑菌活性,利用微量肉汤稀释法检测MLHE最小抑菌浓度（MIC）、分光光度计测定OD630细菌生长曲线以及半固体培养基测定MLHE对分离大肠杆菌丛动能力的影响。结果表明,0.25g/mL的MLHE可显著抑制大肠杆菌的增殖及丛动能力。该研究结果为指导鸭大肠杆菌临床用药及防控提供了理论依据。
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