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牛布鲁氏菌毒力基因Virb8间接ELISA检测方法的建立与应用

文献类型： 中文期刊

作者： 张剑 1 ; 马卫明 2 ; 张亮 3 ; 何洪彬 4 ; 丁家波 5 ;

作者机构： 1.中华女子学院山东分院

2.山东农业大学动物科技学院

3.中国石油大学(华东)石油工程学院

4.山东省农业科学院奶牛研究中心

5.中国兽医药品监察所

关键词： 布鲁氏菌;Virb8;间接ELISA

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2013 年 46 卷 16 期

页码： 3460-3469

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】布鲁氏菌virb8蛋白是布鲁氏菌的重要毒力因子,本研究拟构建含布鲁氏菌Virb8基因的原核表达载体,利用纯化蛋白作为包被抗原,建立检测牛布鲁氏菌血清抗体的间接ELISA方法(iELISA)。【方法】根据GenBank中的牛型布鲁氏杆菌Virb8序列,设计一对引物,以布鲁氏菌疫苗株S2全基因组DNA为模板扩增Virb8的基因,将目的基因克隆入PEASY-T3,经测序正确后,与载体pET-32a(+)连接,构建重组表达质粒pET-32a-Virb8,转化E.coli BL21(DE3),诱导表达融合蛋白pET-32a-Virb8,经SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定后,采用Ni-NTA Spin Kit纯化目的蛋白,利用所建立的iELISA方法对235个临床奶牛血清样本进行检测,并与虎红平板凝集实验进行比较。【结果】成功构建了含Virb8的表达载体,经多次对表达条件的优化,大量表达了目的蛋白,建立的iELISA方法具有稳定、灵敏的特点,与虎红平板凝集试验的符合率可达97.02%。【结论】所建立的iELISA方法是一种有效的牛布鲁氏菌病血清学诊断的方法,为进一步研究其免疫原性和抗感染保护作用奠定了基础。

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