科研产出
甘薯淀粉合成相关酶基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为研究甘薯块根淀粉合成酶基因的表达特征,本研究以淀粉含量不同的两个品种为试验材料,利用转录组数据克隆了甘薯颗粒结合淀粉合成酶GBSS、异淀粉酶ISA、淀粉分支酶SBEⅠ、SBEⅡ的cDNA片段,采用实时荧光定量RT-PCR方法对块根不同生长期淀粉合成相关酶基因的表达进行研究。结果表明,在甘薯不同生长时期,淀粉含量从块根形成期开始逐渐积累,到栽插后80 d、110 d时达到高峰,在块根膨大后期,淀粉含量相对稳定。IbGBSSⅠ、IbSBEⅡ、IbISA 3个基因表达量呈双峰曲线变化,IbSBEⅠ表达呈单峰曲线变化。IbGBSSⅠ、IbISA在栽插后70 d和100 d时表达量达到高峰,IbSBEⅠ在栽插后70 d表达量达到最大。在不同类型甘薯品种中,IbGBSSⅠ在高淀粉品种‘漯徐薯8号’中的表达量显著高于‘郑薯20’,低淀粉品种‘郑薯20’的IbISA表达量显著高于‘漯徐薯8号’。
关键词： 甘薯(Ipomoea batatas L.) 淀粉合成相关酶基因 克隆 荧光定量 RT-PCR 基因表达
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蓝莓角鲨烯环氧化酶基因的克隆与表达分析
《山东农业科学 》 2019
摘要：角鲨烯环氧化酶(SQE)催化角鲨烯合成三萜类骨架β-香树酯前体2,3氧化鲨烯,是熊果酸合成途径中的重要限速酶.本研究采用RT-PCR技术从'喜来'蓝莓根中克隆得到VcSQE基因,全长序列1 744 bp,序列分析结果表明,其含有1 620 bp开放阅读框,编码539个氨基酸;氨基酸同源序列分析表明,蓝莓与其它物种SQE蛋白氨基酸序列相似性很高,与山茶科的茶相似性最高,达90.6%,与猕猴桃相似性为89.7%;不同植物SQE蛋白序列分析发现,该类植物SQE含有3个保守结构域,均在VcSQE中存在;荧光定量试验表明,VcSQE基因在叶中表达量最高,根中表达量最低.
关键词： 蓝莓 角鲨烯环氧化酶基因 生物信息学分析 荧光定量
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蓝莓鲨烯合酶基因的克隆与表达分析
《山东农业科学 》 2019
摘要：鲨烯合酶基因(SQS)在植物三萜类化合物合成途径中起着重要作用,是上游代谢通路中的关键基因.本研究采用RT-PCR技术从'喜来'蓝莓根中克隆得到VcSQS基因,序列全长1 489 bp,序列分析结果表明,其含有1 242 bp的开放阅读框,编码413个氨基酸.氨基酸同源序列分析表明,蓝莓与其它物种SQS蛋白氨基酸序列相似性很高,与山茶科的茶相似性最高,达90.58%,与葡萄相似性达87.92%.荧光定量试验结果表明,SQS基因在蓝莓叶中的表达量最高,芽中的最低.
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鸡传染性支气管炎病毒M41株的致病性及排毒规律
《中国兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：本试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)呼吸型M41标准株的S1基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-M41 SYBR GreenⅠReal-Time PCR标准曲线。通过对8日龄SPF鸡人工感染IBV-M41发病,采用Real-Time PCR方法跟踪检测其泄殖腔排毒情况;剖检并采集试验鸡的相关器官制作病理切片;在临床观察的基础上记录试验鸡的体质量、体温等指标。结果显示,所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到28.3拷贝/μL的病毒核酸。人工感染病毒3～15 d后在鸡的排泄物中均检测到了病毒;攻毒组鸡临床症状明显,相关组织器官均呈现不同程度的病变。该病毒致病性试验、排毒规律和real-time PCR检测方法的建立,为IBV感染鸡作为实验动物模型进行相关药物的临床药效评价提供方法与依据。
关键词： real-time PCR 鸡传染性支气管炎病毒 IBV-M41 病理变化 排毒规律
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IP-10作为牛结核病诊断标志物的初步探究
《中国兽药杂志 》 2018 北大核心
摘要：为评价细胞因子IL-12 p40、IP-10和TNF-α转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。采集田间筛选的结核病阳性牛、结核病阴性牛以及牛分枝杆菌68002人工感染牛的外周血淋巴细胞,经牛结核菌素(PPDB)、重组蛋白CFP-10-ESAT-6(CE)、MPT63、PET和PBS分别刺激6 h,提取细胞总RNA,用荧光定量PCR检测IL-12 p40、IP-10、IFN-γ和TNF-α的转录水平。结果显示结核病阳性牛的外周血淋巴细胞经PPDB和CE刺激后,其IP-10的m RNA转录水平显著高于结核病阴性牛,且与IFN-γ的m RNA转录水平具有良好的相关性;初步建立牛结核病IFN-γ和IP-10的Real-time PCR检测方法,其对临床阳性样本的检出率分别为71.45%和78.57%。因此,IP-10的m RNA转录水平与牛分枝杆菌的感染相关,有作为牛结核病诊断标志物的潜力。
关键词： 牛结核病 诊断 IP-10 IFN-γ Real-Time PCR
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Real-Time PCR方法对IBV弱毒苗致弱分析
《山东农业科学 》 2015
摘要：在前期研究中,对QX基因型IBV分离株SDZB0808在SPF鸡胚连续传代前后毒株(P1和P100)进行全基因组测序。针对P1和P100毒株基因组的差异,设计特异性引物,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量检测方法对其进行定量分析。结果显示:该野毒株强、弱基因并存,经鸡胚传代后,强毒毒株所占比例逐步下降,弱毒毒株所占比例逐步上升,相对值呈下降趋势,接近于零。从而推测:传染性支气管炎病毒致弱原因可能是鸡胚对弱毒基因的定向选择性筛选的结果。
关键词： 鸡传染性支气管炎 Real-Time PCR IBV弱毒苗 致弱
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猪IL-10 SYBR Green Ⅰ Real-time PCR检测方法的建立
《家畜生态学报 》 2014 北大核心
摘要：白介素-10(IL-10)是一种具有免疫抑制作用的多能细胞因子.能够引发猪免疫抑制效应的多种病毒在感染宿主时均伴随有明显的IL-10上调,其中就包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),然而并不是所有的PRRSV毒株都能上调IL-10.为了详细探讨PRRSV免疫抑制与IL-10上调之间的关系以及PRRSV感染上调IL 10的具体分子机制,本研究针对猪IL-10以及看家基因β actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建了各自含有IL-10、βactin引物扩增序列的重组质粒为阳性标准品,建立了以2△△ct为基础的SYBR GreenⅠrealtime PCR检测方法.该方法线性关系良好;敏感性高,两种基因的检测下限均为1×101 copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性良好,批内变异系数小于2%,批间变异系数小于3%;目的基因及内参基因的扩增效率较高,分别为92.7%、97.8%.综上所述,该方法可以用于猪IL-10 mRNA水平的表达分析.
关键词： 猪 白介素-10 PRRSV 免疫抑制 Real-time PCR
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转基因抗虫玉米的定量检测
《中国农学通报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：建立高效、快速、准确的抗虫转基因玉米MIR162转化体特异性实时荧光PCR(real-time PCR)检测方法。采用SYBR Green I和Taqman探针2种定量方法对抗虫转基因玉米MIR162进行了检测研究。SYBR Green I法MIR162转化体特异性片段和内标基因zSSIIb的熔解曲线均表现为单一峰,扩增特异性强;二者的扩增效率均在90%~100%之间,标准曲线相关系数R2均大于0.998。2种定量方法的检测限(LOD)均为24个拷贝,定量限(LOQ)为48个拷贝,灵敏度较高。重复测试结果表明,SYBR Green I法的标准偏差(SD)变化范围为0.05~0.13,相对标准偏差(RSD)范围为0.17%~0.40%,Taqman探针法的SD变化范围为0.03~0.14,RSD范围为0.11%~0.44%,说明2种定量检测方法具有良好的重复性和精密度。对MIR162含量为3%、1%和0.5%的混合样品的定量结果为:3.13%、1.09%、0.53%(SYBR Green I法)和3.07%、1.02%、0.50%(Taqman探针法),RSD均小于10%,T检验分析表明2种定量方法定值结果差异不显著。本研究建立的2种实时荧光定量PCR均可有效对转基因玉米MIR162进行定量检测,可根据不同实际需求及实验室条件进行选择相应的检测方法。
关键词： 转基因抗虫玉米 SYBR Green I Taqman real-time PCR
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猪IL-10 SYBR Green I Real-time PCR检测方法的建立
《家畜生态学报 》 2014 北大核心
摘要：白介素-10(IL-10)是一种具有免疫抑制作用的多能细胞因子。能够引发猪免疫抑制效应的多种病毒在感染宿主时均伴随有明显的IL-10上调,其中就包括猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),然而并不是所有的PRRSV毒株都能上调IL-10。为了详细探讨PRRSV免疫抑制与IL-10上调之间的关系以及PRRSV感染上调IL-10的具体分子机制,本研究针对猪IL-10以及看家基因β-actin的基因序列分别设计一对特异性引物,构建了各自含有IL-10、β-actin引物扩增序列的重组质粒为阳性标准品,建立了以2-△△Ct为基础的SYBR GreenⅠrealtime PCR检测方法。该方法线性关系良好;敏感性高,两种基因的检测下限均为1×101copies/μL;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性良好,批内变异系数小于2%,批间变异系数小于3%;目的基因及内参基因的扩增效率较高,分别为92.7%、97.8%。综上所述,该方法可以用于猪IL-10mRNA水平的表达分析。
关键词： 猪 白介素-10 PRRSV 免疫抑制 Real-time PCR
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苗期干旱对花生抗病相关基因PnAG_3的表达及耐旱生理指标的影响
《农业生物技术学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为确定抗病基因PnAG3与花生抗旱性关系,本实验利用土壤盆栽试验,通过控水模拟干旱条件,利用荧光定量方法分析不同程度干旱、苗期不同抗病花生(Arachis hypogaea L.)品种PnAG3基因的表达变化,同时测定它们耐旱生理指标的变化。结果表明,抗病品种在中度干旱胁迫下超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活力分别升高了3.15、2.55和4.95倍,而不抗病品种在3种处理下差异不显著;丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量在不同干旱程度下均有所升高,且不抗病品种升高幅度大于抗病品种;基因PnAG3的表达量在抗病品种中要高于不抗病品种,但抗病品种在中度和重度干旱胁迫下基因表达量出现的峰值较不抗病品种早,与CAT活性的变化相似。整体来看,SOD呈持续上升趋势,而基因PnAG3表达量、POD、CAT和MDA呈现先上升后下降的趋势,结合耐旱生理指标及抗病相关基因PnAG3的变化情况,基因PnAG3表达量变化与耐旱生理指标的变化有相关性,且在抗病品种中基因PnAG3的表达量大于不抗病品种,推测基因PnAG3的功能与花生抗逆性有关。本研究为进一步研究花生抗性育种和种质筛选提供依据。
关键词： 花生 干旱胁迫 荧光定量 逆境生理 NBS-LRR
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