科研产出
花生中一个NBS-LRR类基因的克隆和表达分析
《山东农业科学 》 2015
摘要：本研究利用同源克隆方法,根据已知植物抗病(R)基因保守结构域设计一对简并引物,采用RTPCR方法对花生抗旱品种J11进行扩增,获得了一个通读的NBS-LRR类基因片段,命名为PDR1。PDR1长度为474 bp,核苷酸比较分析表明,PDR1与已克隆的大豆抗性基因(XM006573278)相似性为75%,与豌豆(AF123699)、苜蓿(XM003604518)抗性基因的相似性为74%;生物信息学预测其全长CDS编码框为5 838bp,编码的蛋白质含1 945个氨基酸,含有NB-ARC等保守结构域。荧光定量PCR分析表明,PDR1基因在花生幼苗根、茎、叶中均有表达,相对表达量为叶>根>茎;干旱胁迫后PDR1的相对表达量在12 h达到顶峰,随后下降,趋于平稳。本研究从花生中成功获得了NBS-LRR类基因的同源序列,为筛选新的抗旱花生种质提供了理论依据。
关键词： 花生 NBS-LRR 同源序列 基因克隆 表达分析
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核桃NBS类抗病基因的克隆及序列分析
《江苏农业科学 》 2015 北大核心
摘要：NBS-LRR蛋白在植物抵御各种病原物的侵袭中发挥重要作用。利用RT-PCR技术以香玲核桃叶片为试材,克隆核桃核苷酸结合位点(nucleotide binding site,NBS)类抗病基因类似物(resistance gene analog,RGA),并对该基因和编码蛋白序列进行分析。结果表明,该序列长512 bp,具有NBS的典型结构域。利用DNAman软件进行相似性比对发现该序列与其他植物的NBS具有较高的同源性。核桃NBS类基因的克隆为其进一步研究应用奠定了基础。
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干旱胁迫对花生PnAG_1基因的表达及生理指标的影响
《中国农业科技导报 》 2012 CSCD
摘要：为了探讨NBS-LRR结构域中抗性相关基因PnAG1与干旱胁迫的相关性,比较花生在不同干旱程度胁迫下主要防御酶活性变化情况以及PnAG1基因表达量变化动态。经干旱胁迫后测定不同时期两花生品种叶片的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性、丙二醛(MDA)含量和PnAG1基因表达量的动态变化。结果表明,在干旱胁迫后两品种的POD、GR、MDA变化均表现出先下降后上升的趋势,SOD活性则为表现为持续上升,而PnAG1基因的表达量变化同样也呈现出先下降后上升的趋势,与防御酶活性变化相似,因此推断PnAG1基因在抗病基础之上可能同植物防御体系存在相关。
关键词： 花生 荧光定量PCR 酶活测定 NBS-LRR 干旱胁迫
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苗期干旱对花生抗病相关基因PnAG_3的表达及耐旱生理指标的影响
《农业生物技术学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为确定抗病基因PnAG3与花生抗旱性关系,本实验利用土壤盆栽试验,通过控水模拟干旱条件,利用荧光定量方法分析不同程度干旱、苗期不同抗病花生(Arachis hypogaea L.)品种PnAG3基因的表达变化,同时测定它们耐旱生理指标的变化。结果表明,抗病品种在中度干旱胁迫下超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)活力分别升高了3.15、2.55和4.95倍,而不抗病品种在3种处理下差异不显著;丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量在不同干旱程度下均有所升高,且不抗病品种升高幅度大于抗病品种;基因PnAG3的表达量在抗病品种中要高于不抗病品种,但抗病品种在中度和重度干旱胁迫下基因表达量出现的峰值较不抗病品种早,与CAT活性的变化相似。整体来看,SOD呈持续上升趋势,而基因PnAG3表达量、POD、CAT和MDA呈现先上升后下降的趋势,结合耐旱生理指标及抗病相关基因PnAG3的变化情况,基因PnAG3表达量变化与耐旱生理指标的变化有相关性,且在抗病品种中基因PnAG3的表达量大于不抗病品种,推测基因PnAG3的功能与花生抗逆性有关。本研究为进一步研究花生抗性育种和种质筛选提供依据。
关键词： 花生 干旱胁迫 荧光定量 逆境生理 NBS-LRR
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一个光敏色素B调控的水稻NBS-LRR基因的表达模式分析
《山东农业科学 》 2011
摘要：利用水稻基因芯片比较野生型、phyA和phyB突变体受连续红光照射后的基因表达图谱,从中筛选到一个受光敏色素B(phyB)介导的红光信号特异诱导的、编码NBS-LRR类蛋白的基因,命名为PB-LRR(phyB-regu lated NBS-LRR)。为了揭示PB-LRR基因在水稻生长发育中的作用,对该基因表达的器官特异性及其对不同激素的应答反应进行了分析。结果表明,PB-LRR基因在叶中表达水平最高,在茎中最低。光对PB-LRR基因表达的诱导是由phyB调控的,与phyA无关。此外PB-LRR基因的表达受外源ABA的抑制,并且受环境因子的调控。构建PB-LRR启动区∶GUS植物表达载体,转化至野生型和phyB突变体中,GUS染色结果表明,在phyB突变体转基因植株中的GUS活性明显低于野生型,而且GUS活性主要出现在叶片上部。这表明PB-LRR基因的表达不仅受phyB介导的光信号调控,而且受发育调控。本研究结果为进一步分析PB-LRR基因在phyB介导的光反应和水稻抗病反应中的作用奠定了基础。
关键词： 水稻 光敏色素 NBS-LRR 基因表达模式 抗病性
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花生NBS-LRR类抗病基因的克隆及原核表达
《中国农业科技导报 》 2010
摘要：根据已知抗病基因的NBS保守区域设计引物,利用PCR技术从花生基因组DNA中克隆得到一个NBS-LRR类抗病基因,序列长539bp,命名为PnAG3。蛋白质序列同源性分析表明多个植物抗病相关蛋白与之有一定的同源性,其中同源性最高的是花生C8_V_253抗性蛋白序列(97%)。将PnAG3基因编码区构建原核表达载体,表达产物分布于包涵体中,大小为47.26KDa,1mmol/LIPTG诱导4h可获得最大表达量。为花生抗黄曲霉品种选育奠定了基础。
关键词： 花生抗病基因 NBS-LRR 生物信息学 原核表达
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