科研产出
应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究
《畜牧兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求。本方法 DNA灵敏度为0.01ng,混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。
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马克斯克鲁维酵母菌的分离鉴定与所产乳糖酶酶学性能研究
《山东农业科学 》 2018
摘要：为研究开发具有应用价值的新型微生物资源,用邻硝基苯酚β-D-半乳糖苷(ONPG)法,从雪莲菌发酵乳中分离到一株产乳糖酶的酵母菌株XL-B36,通过分子鉴定,确定该菌为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus).对该菌所产乳糖酶酶学性能进行研究,该酶最适反应温度和最适pH值分别为47℃和7. 0,在35~40℃具有良好的稳定性.pH 5. 0~8. 0表现稳定,pH 7. 0时出现酶活峰值.金属离子Mn2+、Mg2+、Na+对酶活具有激活作用,Ca2+和Zn2+对酶活具有抑制作用,Cu2+和EDTA对酶活具有完全抑制作用.
关键词： 马克斯克鲁维酵母 β-半乳糖苷酶 分子鉴定 酶学性质
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肉鸡产业链主要抗药性菌株的分离鉴定与抗药性分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：为分析肉鸡产业链各环节主要抗药性菌株的流行状况,保证食源性公共卫生安全,本试验采集肉鸡养殖、屠宰及加工各环节的样本108份,通过6种不同含药物培养基初步筛选抗药性菌株,经VITEK2自动微生物鉴定和自动药敏检测,并与微量肉汤稀释法药敏试验进行比较。结果表明,从肉鸡产业链各环节共鉴定获得664株细菌,其中前三位的优势细菌为大肠杆菌375株(56.5%)、肺炎克雷伯菌110株(16.6%)和奇异变形杆菌79株(11.9%)。微量肉汤稀释法药敏试验结果显示,大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌对阿莫西林/克拉维酸、多西环素抗药率都在90%以上,对环丙沙星和丁胺卡那霉素抗药率在34.6%~87.0%之间,对美罗培南敏感。三种抗药菌显示多重抗药性特征,集中在三、四重抗药水平。VITEK2自动药敏试验结果显示,大肠杆菌对氨苄西林、头孢唑啉抗药率分别是98.3%、92.6%;全部对厄他培南、亚胺培南敏感。肺炎克雷伯菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦抗药率分别是97.3%、89.1%;大部分对厄他培南和亚胺培南敏感,肺炎克雷伯菌的抗药性水平普遍稍高于大肠杆菌,二者呈正相关性。微量肉汤稀释法和VITEK2自动药敏试验两种方法重叠使用了环丙沙星和丁胺卡那霉素,检测结果差异不显著。肉鸡产业链各环节大肠杆菌的抗药性显著高于EUCAST数据库的结果,建议相关部门应加强细菌抗药性监测,并逐步降低抗药性,保障食品安全和公共卫生。
关键词： 肉鸡 抗药性 大肠杆菌 肺炎克雷伯菌 鉴定 药敏试验
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黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选及鉴定研究
《食品研究与开发 》 2018 北大核心
摘要：黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)污染花生、玉米等农产品和食品,具有极强的毒性和致癌性。采用香豆素为唯一碳源从海水中分离降解AFB_1菌株,其中菌株M8能降解71.8%的AFB_1。通过上清液、菌悬液、胞内液降解AFB_1分析,初步判断菌株M8分泌至胞外的活性物质主导AFB_1的生物降解作用。通过菌株形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因系统发育学分析,鉴定菌株M8属于假单胞菌属,命名为Pseudomonas sp. M8。从海水中分离菌株M8丰富了降解AFB_1降解微生物资源,为研究其作用机理和应用于黄曲霉毒素的脱毒奠定了基础。
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副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定及初步应用
《中国动物检疫 》 2018
摘要：为建立一种有效提取高纯度副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的方法,进一步阐明HPS的致病机制,通过热酚水法提取LPS,浓缩后,采用酶解法和超离法纯化提取物,分别用硫酸-苯酚法、BCA法、紫外分光光度法,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,通过SDSPAGE电泳银染方法鉴定提取物。将提取的LPS作用于猪肺泡巨噬细胞,通过荧光定量方法检测IL-1β的表达量差异。结果显示:纯化的LPS平均产率为2.56%;LPS提取物中不含还原性单糖,多糖含量为3.27%,蛋白含量为0.77%,核酸含量为0.90%;提取的LPS能够引起猪肺泡巨噬细胞IL-1β表达量显著上调。因此,通过该方法提取纯化的LPS可以用于HPS与宿主细胞间作用机制的研究。
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产壳聚糖酶菌株ncps116发酵条件优化及其酶学性质
《化工进展 》 2018 EI 北大核心 CSCD
摘要：通过形态学观察、生理生化实验及16S r DNA序列分析鉴定产壳聚糖酶菌株ncps116为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。通过单因素和正交实验对该菌株发酵产酶条件进行了优化。结果表明其最适产酶条件为:粉末壳聚糖15g/L,硫酸铵30g/L,初始p H 6.0,温度32℃,发酵时间72h,500m L三角瓶装液量120m L,接种量4%,在此条件下该菌株产壳聚糖酶活力达43.89U/m L。经硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析对菌株发酵液中的壳聚糖酶进行了纯化,并对其酶学性质进行了初步研究。结果表明,壳聚糖酶经SDS-PAGE分析,其分子量为4.37万。该酶酶促反应最适p H和最适反应温度分别为5.6和50℃,在低于40℃、p H 3.6~5.6范围内较为稳定,5mmol/L的Mn~(2+)对该酶酶活力有明显的增强作用,Cu~(2+)、Ni~(2+)、Fe~(3+)、Ag~+对该酶酶活力有不同程度的抑制作用。壳聚糖酶酶促反应的米氏常数(K_m)为11.10mg/m L,最大反应速率(V_(max))为1.38μmol/(min·m L),对底物表现出较强的专一性。此外,该酶能够抑制黑曲霉(Aspergillus niger)菌丝的生长。
关键词： 壳聚糖酶 发酵条件优化 分离纯化 酶学性质 蜡状芽孢杆菌
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保加利亚乳杆菌N-乙酰胞壁质酶的原核表达和鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：为研究保加利亚乳杆菌(LB)N-乙酰胞壁质酶(Mur)的分子生物学特性,根据已发表的保加利亚乳杆菌核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,PCR扩增LB MN株不含跨膜区域序列的mur基因,片段回收后克隆至pMD19-T载体并进行鉴定,再将其亚克隆于原核表达载体pET-30a(+)中构建重组表达质粒pET-30a(+)-mur,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达。SDS-PAGE和Western blot分析显示重组Mur蛋白分子量约为21 kD,能在大肠杆菌中高效表达。
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