文献类型： 中文期刊

作者： 刘艳艳 ¹ ; 范阳阳 ¹ ; 步迅 ¹ ; 胡悦 ¹ ; 东野升金 ¹ ; 谭晴晴 ¹ ; 张全芳 ¹ ;

作者机构： 1.山东省农业科学院生物技术研究中心/山东省农业科学院应用生命科学实验室

关键词： 动物毛纤维;多重实时荧光PCR;鉴定

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2018 年 07 期

页码： 1540-1549

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求。本方法 DNA灵敏度为0.01ng,混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。