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金银花炭疽病病原菌的分离鉴定和qPCR检测

文献类型： 中文期刊

作者： 朱桐杉 1 ; 谭晴晴 2 ; 刘国霞 2 ; 步迅 2 ; 张全芳 2 ; 张永清 1 ;

作者机构： 1.山东中医药大学药学院

2.山东省农业科学院农作物种质资源研究所

关键词： 金银花;炭疽病;鉴定;实时荧光定量PCR

期刊名称： 中药材

ISSN： 1001-4454

年卷期： 2022 年 45 卷 011 期

页码： 2556-2561

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:分离鉴定金银花炭疽病病原菌,并建立该病原菌的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系.方法:采集金银花炭疽病病叶标本,对病原菌进行分离和纯化,利用柯赫氏法则检测病原菌的致病性,通过形态学观察结合分子生物学分析鉴定病原菌;基于病原菌的ITS序列设计特异引物和TaqMan荧光探针,并基于该病原菌特异引物的扩增产物制备重组质粒标准品,利用标准品DNA构建qPCR的标准曲线;并对建立的qPCR方法进行特异性、灵敏度和实际样本验证.结果:明确从金银花炭疽病病叶片中分离纯化的菌株为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeos-porioides.建立的qPCR快速检测方法能够特异性检测该病原菌,灵敏度高,最低检测限为2.94×102 copies/μL,比常规PCR检测灵敏度提高100倍.实际样本验证结果显示,在20例金银花病叶中,4例为炭疽病阳性,与DNA测序结果相符.结论:本研究明确胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides为金银花炭疽病的病原菌,所建立的qPCR方法能对金银花炭疽病进行快速、准确的检测,可以为该病害的早期防治提供技术支持.

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