科研产出
H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用
《病毒学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：H13亚型禽流感病毒以往只在海鸥、鸭等水禽中被发现,2018年,我们实验室报道了蛋鸡感染H13亚型禽流感病毒的证据,表明H13亚型禽流感病毒存在从水禽中溢出感染陆禽的风险,因而有必要加强对H13亚型禽流感病毒的监测。实时荧光定量PCR由于具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点,在病原监测工作中得到了广泛应用。本研究以H13亚型禽流感病毒的HA基因作为靶基因,设计了一对特异性荧光定量PCR检测引物,通过特异性试验、敏感性试验等,建立了H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法,并应用建立的检测方法对海鸥粪便样品进行核酸检测。实验结果发现,该检测方法的灵敏度为1.60×10~0拷贝/μL;该检测方法对H1、H3、H5、H6、H7和H9等6个亚型的禽流感病毒无交叉反应;该检测方法的敏感性是常规PCR的10倍;海鸥粪便样品中H13亚型禽流感病毒的核酸检测阳性率为18.8%。我们建立的H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强等特点,该检测方法可用于大量临床样品的快速检测,为H13亚型禽流感病毒监测工作的顺利开展提供了技术支撑。
关键词： H13亚型禽流感病毒 荧光定量PCR 检测 HA基因
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金银花炭疽病病原菌的分离鉴定和qPCR检测
《中药材 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的:分离鉴定金银花炭疽病病原菌,并建立该病原菌的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系.方法:采集金银花炭疽病病叶标本,对病原菌进行分离和纯化,利用柯赫氏法则检测病原菌的致病性,通过形态学观察结合分子生物学分析鉴定病原菌;基于病原菌的ITS序列设计特异引物和TaqMan荧光探针,并基于该病原菌特异引物的扩增产物制备重组质粒标准品,利用标准品DNA构建qPCR的标准曲线;并对建立的qPCR方法进行特异性、灵敏度和实际样本验证.结果:明确从金银花炭疽病病叶片中分离纯化的菌株为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeos-porioides.建立的qPCR快速检测方法能够特异性检测该病原菌,灵敏度高,最低检测限为2.94×102 copies/μL,比常规PCR检测灵敏度提高100倍.实际样本验证结果显示,在20例金银花病叶中,4例为炭疽病阳性,与DNA测序结果相符.结论:本研究明确胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides为金银花炭疽病的病原菌,所建立的qPCR方法能对金银花炭疽病进行快速、准确的检测,可以为该病害的早期防治提供技术支持.
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绍兴一株牛传染性鼻气管炎病毒的分离与鉴定
《畜牧产业 》 2021
摘要：本研究对绍兴某疑似发生流行病牛场的送检样品进行实验室检测,将检测信息反馈给该牛场作为疫病防控依据。样品经接种MDBK细胞、PCR鉴定、序列分析试验。样品接种MDBK细胞出现细胞病变,PCR扩增出Bo HV-1目的条带,序列分析与Bo HV-1参考株相似性为99%,分离株毒价为1×106.187 TCID50/0.1 mL。证明分离获得的毒株为牛传染性鼻气管炎病毒是此次该牛场引发流行病的病原之一,为牛场疫病防控提供科学依据,同时为后续研制IBR相关疫苗提供了毒种准备。
关键词： 牛传染性鼻气管炎病毒 分离 鉴定
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降解呕吐毒素微生物的筛选鉴定及其应用
《食品安全质量检测学报 》 2021
摘要：目的筛选高效降解呕吐毒素（deoxynivalenol, DON）的微生物并鉴定其种类。方法分离培养出高效降解DON的微生物,鉴定该微生物种类,分析微生物各组分降解DON的效率,并在DON超标的小麦麸皮中开展应用。结果筛选到高效降解DON的菌株MB-1,该菌株能降解82.3%的DON。鉴定结果表明菌株MB-1被命名为Bacillus aryabhattai MB-1,中文名为阿氏芽孢杆菌MB-1。各组分降解DON的结果表明菌株MB-1产生至胞外的活性物质主导DON的生物降解。菌株MB-1可降解小麦麸皮中80.4%的DON。结论本研究筛选到降解DON的阿氏芽孢杆菌MB-1,这是首次报道阿氏芽孢杆菌可高效降解DON,为降解去除小麦等谷物中的DON提供了菌种资源。
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52.5%抑快净水分散剂在番茄中的残留检测及消解动态研究
《山东农业科学 》 2021
摘要：抑快净由霜脲氰及恶唑菌酮混配而成。本试验采用高效液相色谱（HPLC）法,对52.5%抑快净水分散粒剂中霜脲氰及恶唑菌酮在番茄中的残留进行检测分析。结果表明在0.01～1.0 mg/kg范围内,番茄中霜脲氰的平均回收率为79.5%～92.8%,相对标准偏差为3.68%～7.36%;在0.01～2.0 mg/kg范围内,番茄中恶唑菌酮的平均回收率为82.4%～103.9%,相对标准偏差为2.96%～6.25%。该方法的准确性、精确性以及灵敏度均达到农药残留分析的要求。霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的消解动态均符合一级动力学特征,并且恶唑菌酮的降解速率快于霜脲氰。霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的最终残留量符合我国最大残留限量标准。
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一种茶树新害虫-贡山喙蓟马Mycterothrips gongshanensis的鉴定
《茶叶通讯 》 2021
摘要：为明确一种在贵州广泛发生为害的茶树芽叶害虫种类,本文在形态鉴定的基础上,通过提取DNA、PCR扩增和测序获得其线粒体COI序列。结果表明:该害虫种类为贡山喙蓟马Mycterothrips gongshanensis（Li,Li & Zhang,2017）,是一种茶树新害虫;实验获得的贡山喙蓟马的15个个体线粒体COI序列种内遗传距离为0.00% ～ 0.46%。研究结果可为该害虫的准确鉴定和科学防控提供基础信息。
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花生品种不同营养器官白藜芦醇含量分析
《花生学报 》 2021
摘要：为筛选高白藜芦醇含量的花生品种,采用超声萃取法提取、高效液相色谱法测定白藜芦醇含量,对28个花生品种不同营养器官中白藜芦醇含量进行了分析。结果表明,不同花生品种不同营养器官中白藜芦醇含量差异较大,所有品种根部、茎部和叶片中白藜芦醇的平均含量分别为0.276 mg/g、0.173 mg/g和0.098 mg/g,白藜芦醇含量整体趋势表现为根>茎>叶片。HY17、HY21、HY32、HY612、HY910、HY911、HY913、HY918、HY919根部白藜芦醇含量（0.289～0.738 mg/g）高于根中平均值;HY19、HY23、HY32、HY50、HY60、HY612、HY 910、HY911、HY913茎中白藜芦醇含量（0.177～0.631 mg/g）高于茎中平均值;HY17、HY19、HY23、HY32、HY38、HY55、HY 910、HY913、HY917叶片中白藜芦醇含量（0.114～0.306 mg/g）高于叶片中平均值。统计分析结果表明,HY50、HY910、HY911、HY913四个花生品种的植株具有较高的开发潜力。该研究为白藜芦醇的提取纯化提供了廉价丰富的来源,也为花生植物废弃物的再加工利用提供了新的思路。
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全生育期鉴定筛选耐盐碱花生品种
《作物学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为改善黄河三角洲滨海盐碱地种植结构,扩大花生种植面积,本研究以22个育成的花生品种(系)为材料,测定了全生育期9个性状指标,利用方差分析、相关分析、聚类分析等进行耐盐碱鉴定及耐盐碱指标筛选.结果表明,盐碱胁迫显著降低花生成苗率,明显抑制花生的生长发育和产量形成,不同品种(系)间在9个鉴定指标上存在较大差异.相对单株产量和相对小区产量均与相对地上部干重、相对主茎高、相对侧枝长呈显著正相关,相对小区产量与相对成苗率、相对地下部干重、相对单株产量显著正相关.全部材料可划分为4个耐盐碱级别,其中高度耐盐碱7份(I级)、较耐盐碱11份(II级)、盐碱胁迫敏感3份(III级)、高度敏感1份(IV级).筛选出花育9307、花育9312、花育9313、6P03、花育9305及花育6303等适于盐碱地种植的高产品种(系).本研究表明,相对地上部干重、相对主茎高、相对成苗率、相对单株产量、相对侧枝长、相对地下部干重可作为简单、直观的花生耐盐碱鉴定指标.
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