科研产出
创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用
《山东农业科学 》 2024
摘要：针对我国缺乏适用于创伤弧菌检测的质粒标准样品的现状，本研究开展了创伤弧菌鉴定即用型定性质粒标准样品的研制和应用工作。首先构建了创伤弧菌毒力基因vvhA的重组质粒，经测序验证后制备成质粒标准样品冻干粉，然后对其进行PCR定性检测及紫外分光光度计法定量分析。均匀性检验结果表明，样品间无显著差异，均匀性良好，符合预期目标；短期稳定性检验结果表明，样品能在4℃、37℃条件下稳定保存14天；长期稳定性检验结果表明，样品能在-20℃条件下稳定保存至少12个月。研究结果表明，创伤弧菌质粒定性标准样品的均匀性和稳定性均符合国家定性标准样品的要求，为创伤弧菌的快速、高通量的定性鉴定分析提供了可靠的参考物质。将标准样品应用于鱼类、贝类等10份海鲜类食品样品的检测中，经传统培养法验证，检测结果准确无误。本研究所研制的创伤弧菌质粒定性标准样品具有较好的商业应用潜力，为其在食品检测领域的推广应用奠定了重要基础。
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基于形态和分子数据的山东梨园新成灾害螨柑橘全爪螨的鉴定
《昆虫学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：【目的】本研究旨在准确鉴定山东梨园一种新成灾害螨，为其进一步研究和有效防控奠定基础。【方法】采用体视显微镜直接观察雌成螨的形态特征，制作雄成螨的侧面观玻片标本，观察其阳茎形态特征，进行形态鉴定。从单头雌成螨中提取基因组总DNA,以螨类特异性引物扩增线粒体细胞色素氧化酶亚基Ⅰ（cytochrome oxidase subunitⅠ, COⅠ）基因及核糖体DNA第一内转录间隔区（internal transcribed spacer 1, ITS1）和第二内转录间隔区（internal transcribed spacer 2, ITS2）基因并测序，所得序列在NCBI网站上进行Blastn比对，下载与其一致性高的相关基因序列构建系统发育树和计算遗传距离，进行分子鉴定。【结果】结果表明，梨树上害螨的雌成螨背部有粗大突起，可确定为全爪螨属Panonychus害螨。雄螨阳茎特征与柑橘全爪螨Panonychus citri的很相似，其COⅠ, ITS1和ITS2基因序列均与柑橘全爪螨的相应序列具有很高的同源性（核苷酸序列一致性在99%以上）,基于COⅠ, ITS1和ITS2基因序列计算的其与柑橘全爪螨间的遗传距离均远低于其与全爪螨属其他种间的遗传距离；在基于COⅠ, ITS1和ITS2基因序列构建的系统发育树上，梨树上害螨均分别与柑橘全爪螨以很高的置信度（分别为99%, 99%和100%）聚在同一分支。【结论】形态特征结合分子数据分析可以确定山东梨园中新暴发成灾的害螨为柑橘全爪螨，说明柑橘全爪螨在中国的分布范围北移了，需引起高度重视。
关键词： 柑橘全爪螨 梨园 害螨 鉴定 阳茎 COⅠ ITS1 ITS2
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苹果主要真菌病害广谱拮抗木霉菌的筛选鉴定及田间防效
《中国生物防治学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为筛选广谱苹果病原真菌拮抗菌，采用平板对峙法、生长速率法，从山东多地果园分离筛选出对4种常见苹果病原真菌具有明显拮抗作用的两株木霉菌YTLY-13和YTLY-36，经其形态特征及翻译延伸因子（translation elongation factor 1,TEF1）序列同源性鉴定，结果表明，两菌株分别为绿木霉Trichoderma virens和哈茨木霉Trichoderma harzianum，对病原菌菌丝生长均有明显抑制作用，抑菌率均在68.45%以上，其中对苹果腐烂病菌的抑菌率相对稍高，达73.92%以上。田间药效结果表明，菌株YTLY-36对4种苹果真菌病害防效显著高于菌株YTLY-13的防效，与代森联、枯草芽胞杆菌防效相当，且生长速度快、发酵简单，具备开发成为果树专用广谱微生物杀菌剂的潜力。
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鸭冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《病毒学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为建立一种鸭冠状病毒(Duck coronaviruses,DuCoV)的临床快速诊断方法,根据鸭冠状病毒1b基因保守区域设计特异性引物,成功建立了用于检测鸭冠状病毒的特异性SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.该方法特异性强、敏感性高、重复性好,对鸭冠状病毒有特异性扩增,最低检测限为8.04×100拷贝/μL,比普通PCR方法敏感10倍,批内变异系数与批间变异系数分别为0.28%~0.34%、0.25%~0.36%,均小于1%.对临床可疑鸭泄殖腔拭子进行检测,本方法与常规PCR方法的检测结果阳性符合率为100%,阴性符合率为96.43%,样本总符合率为97.62%.本研究建立的鸭冠状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,可用于鸭冠状病毒的临床快速诊断及流行病学监测.
关键词： 鸭冠状病毒 检测 SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR
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鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定
《中国动物传染病学报 》 2023 北大核心
摘要：近几年，鹅“白点病”频发。本研究从江苏沛县地区肝脏有坏死点的发病鹅中收集肝脏病料，进行病毒分离，通过RT-PCR检测、序列分析进行病毒鉴定，并回归雏鹅进行致病性试验。结果发现：该毒株在鹅胚上生长良好；回归鹅能完全复制出临床中肝脏出现坏死点的病变，并能从实验鹅中重新分离到该病毒；对其主要抗原基因σC进行测序比对和进化树分析发现，其与番鸭呼肠孤病毒基因序列的进化关系较近，同源性为89.6～98.9%。本研究证实了鹅“白点病”的病原为番鸭呼肠孤病毒，为该病的防控奠定了基础。
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不同小麦品种类胡萝卜素含量比较分析
《农学学报 》 2023
摘要：类胡萝卜素是影响小麦面粉及面制品颜色和营养品质的重要因素，具有抗氧化、防癌症、预防夜盲症等功能。为了研究不同品种的类胡萝卜素含量，用‘19Q1121‘’鲁原502‘’济麦22‘’鲁研128’‘鲁原309’为实验材料，通过超高效液相色谱（UPLC）和串联质谱（MS/MS）的方法，测定类胡萝卜素的组分及含量。结果表明类胡萝卜素主要成分有叶黄素、玉米黄质类、角黄素、叶黄素棕榈酸酯、叶黄素二棕榈酸酯、叶黄素油酸酯等。其中，‘鲁原309’叶黄素的含量为7.45μg/g，明显高出其他品种。本试验获得了培育高类胡萝卜素含量小麦新品种的方法，为小麦营养品质改良奠定了基础。
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枯草芽孢杆菌KC1723的鉴定及生物学特征研究
《山东农业科学 》 2023
摘要：本试验从土壤中分离筛选出芽孢杆菌菌株KC1723,并对菌株形态、生理生化特征及16S rDNA序列进行分析。结果显示：菌株KC1723呈杆状，链状排列，产生椭圆形芽孢；生理生化特征与枯草芽孢杆菌一致；16S rDNA序列与枯草芽孢杆菌的同源性为99.39%。因此确定菌株KC1723为枯草芽孢杆菌。菌株KC1723最优生长培养基为LB培养基，最适生长pH值为7.0,对暹罗炭疽菌、平头炭疽菌和链格孢菌有良好的抑制作用。本试验为生防菌的开发应用提供了重要的菌种资源。
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生防菌棘孢木霉的分离鉴定及生物学特性研究
《山东农业科学 》 2023
摘要：本试验从羊茅草根际土壤中分离筛选出生防菌株GT30,经形态学和分子生物学鉴定,确定GT30为棘孢木霉,并对其生物学特性和抑菌效果进行研究.结果显示,菌株GT30 菌丝生长较快;孢子梗对生生长,主分支呈树状;分生孢子呈球形,外璧光滑.棘孢木霉GT30 最适生长pH值为 5~6,最适温度为 25~30℃,葡萄糖和牛肉膏分别是GT30 生长所需最佳碳源和氮源,光照有利于GT30 产孢,Mg2+和Ca2+离子可促进GT30 菌丝生长及产孢.平板对峙培养试验表明,棘孢木霉GT30 对大蒜白斑病菌和葡萄炭疽病菌抑制效果较好,抑菌率分别为 63.7%和 61.4%.本研究结果可为开发优异生防木霉菌剂提供菌种资源和理论基础.
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葡萄根癌病研究进展及防治措施
《中外葡萄与葡萄酒 》 2022 北大核心
摘要：葡萄根癌病由葡萄土壤杆菌(Allorhizobium vitis)引起,主要通过伤口侵染,促使植物细胞产生过量的生长激素,从而形成瘤状物,影响植株的营养吸收,进而降低葡萄产量和品质.本文综述了葡萄根癌病的发病症状、病原菌种类、病原菌的基因组信息及分类地位,比较分析了基于特异性引物建立的葡萄土壤杆菌的PCR、荧光定量PCR、数字微滴PCR、环介导等温扩增技术等分子生物学检测技术的优缺点,阐述了病原菌的发病机制及对该病的综合防治方法,为葡萄根癌病的后期研究及生产防治提供参考.
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