科研产出
山东省部分地区2018年收获玉米的真菌污染状况研究
《食品安全质量检测学报 》 2019
摘要：目的 对山东省部分地区 2018 年产玉米表面污染真菌进行调查.方法 在马铃薯葡萄糖培养基(potato dextrose agar, PDA)上通过稀释涂布的传统分离培养方法获得真菌菌株, 利用传统的形态学与分子生物学技术相结合的方法对真菌种类鉴定.结果 共获得真菌菌株 169 株, 经形态学鉴定隶属于 8 属: 镰刀菌属(Fusarium), 青霉属(Penicillum), 曲霉属(Aspergillus), 交链孢属(Alternaria), 枝顶孢属(Acremonium), 梗霉属(Lichtheimia), 枝孢属(Cladosporium)、篮状菌属(Talaromyces).其中, 镰刀菌(Fusarium)、青霉(Penicillum)、曲霉(Aspergillus)分离获得的数量最多, 镰刀菌种类是引起玉米穗腐病的主要病原菌, 其污染主要来自于田间.随玉米仓储时间延长, 优势真菌改变为青霉属和曲霉属.结论 山东地区玉米真菌污染初期以田间污染为主, 储藏过程中优势菌群受环境影响发生改变; 需要根据真菌污染状况改进提升传统果穗囤藏技术.
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牛流行热病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国兽医科学 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为建立牛流行热病毒(BEFV)的荧光定量PCR检测方法,本研究根据GenBank中已登录的BEFV的G基因保守序列设计了1对特异性引物.结果显示,建立的标准曲线线性关系较好,其相关系数为0.996 3.该方法仅对BEFV检测为阳性,表明其特异性强.该方法的检测下限约为4.0*10~1 copies/μL,比普通PCR敏感性高10倍.重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于0.76%.利用本方法分别对45份牛病料样品进行检测,结果检出了11份阳性样品,表明所建立的荧光定量PCR方法准确可靠,可以用于BEFV的快速诊断和定量分析.
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牛病毒性腹泻病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《山东农业科学 》 2019
摘要：本研究旨在建立一种灵敏度高、特异性强、重复性好,能快速检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的方法。根据BVDV的E2基因保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了检测BVDV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法。将标准阳性样品10倍梯度稀释检测灵敏度,用能感染奶牛的其它病毒做对照检测特异性,用临床样本检测重复性。结果表明,该方法与能感染奶牛的其它几种病毒均无交叉反应,检出敏感度达4.87×10~1 copies/μL,比常规PCR检测方法高10倍。同时检测了5个规模化奶牛场送检的67份奶牛腹泻样本,其BVDV检出率为46.27%(31/67)。本研究成功建立了BVDV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,为BVDV的快速诊断和定量分析提供了技术支撑,具有很好的应用前景。
关键词： 牛病毒性腹泻病毒(BVDV) 荧光定量PCR E2基因 检测
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葡萄根癌病病原菌的筛选及鉴定
《农学学报 》 2019
摘要：明确引起济南南部山区葡萄根癌病的病原菌种类,为病害防治提供科学依据。以形态学为基础,结合生理生化及分子生物学方法对‘赤霞珠’葡萄根癌病样品进行分离鉴定。结果表明,从根部肿瘤组织中利用MW选择性培养基分离纯化了12株类似于根癌土壤杆菌的细菌。形态学和16S rDNA检测表明12株菌均为根癌土壤杆菌属。其中生化Ⅰ型5株、生化Ⅱ型4株、生化Ⅲ型3株。采用针刺涂抹法接种胡萝卜圆盘、向日葵、葡萄幼苗,确定了2株强毒性菌株JC02、JC05。2个株菌均为生化Ⅲ型菌株。质粒生物学鉴定表明JC02、JC05菌株含有Ti质粒,为章鱼碱类型。研究表明,为害济南南部山区‘赤霞珠’葡萄根癌病的病原菌为葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)。
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谷子籽粒小米黄色素含量的测定
《中国粮油学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：小米黄色素含量的定量测定不仅有助于小米产品质量评判的标准化,促进小米产品的精深加工,而且对于谷子品质育种也具有重要意义。本研究参考美国谷物化学师协会(AACC)14-50方法,研究了不同提取溶剂、提取方式、提取时间等因素对小米黄色素含量的影响,优化完善了小米黄色素含量的测定。测定谷子籽粒小米黄色素含量,以β-胡萝卜素制作标准曲线,利用水饱和正丁醇振荡提取3 h,10 000×g离心8 min取上清,在445 nm下定量测定小米黄色素含量;β-胡萝卜素吸光度和质量浓度在0～5.0μg/mL范围内关系良好,相关系数r=0.999 9。该方法测定小米黄色素,相对标准偏差<3%,加标回收率92.77%～103.18%,灵敏准确、简便快速,精密度较高,适用于小米黄色素的测定。
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奶牛卵巢中一株IBRV的分离鉴定
《山东农业科学 》 2019
摘要：利用MDBK细胞从奶牛卵巢中分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)毒株。设计扩增IBRV的通用引物,对卵巢组织中的病毒进行PCR扩增及测序;对卵巢组织感染MDBK细胞,进行IBRV的分离培养;测定IBRV的TCID_(50),同时利用IBRV FA进行鉴定。结果表明,分离到的病毒在MDBK细胞上产生了明显的病变;用特异性引物可扩增出特异性目的条带,目的序列与IBRV基因序列一致;该毒株的病毒滴度为10~(6.75) TCID_(50)/mL。
关键词： 卵巢 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) 鉴定 细胞病变 TCID_(50)
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禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
《畜牧与兽医 》 2019 北大核心
摘要：禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。
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消氨菌的分离、鉴定及其急性经口毒性
《山东农业科学 》 2019
摘要：为筛选出安全且能降低畜禽舍内氨气浓度的菌株,本研究从鸡粪、活性淤泥等6个样本中分离单一菌株,检测菌株的除氨效果,并对较优除氨功能的菌株进行鉴定和急性经口毒性试验。结果表明,分离到两株单一菌株,经检测其中一株具有较强除氨能力,初步鉴定该菌株属于金黄杆菌属(Chryseobacterium);经急性经口毒性试验发现,菌液对小鼠半数致死量(LD_(50))大于20 g/kg BW,属实际无毒级;处理14 d后,小鼠血清中谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)、尿素(BUN)、肌酐(Cre)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量与对照组均无显著性差异(P>0.05)。因此,该菌安全无毒副作用,可应用于畜禽养殖业有害气体的消除。
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