科研产出
不同含油量花生品种中二酰甘油酰基转移酶基因的表达分析
《山东农业科学 》 2023
摘要：二酰甘油酰基转移酶(DGAT)在植物油脂合成过程中发挥重要作用.本研究利用实时荧光定量PCR检测方法,以低油低油酸品种花育 17 号、高油高油酸品种花育 910 和高油低油酸品种花育 918 为试材,分析了不同含油量花生品种不同发育时期种子中AhDGAT1-1、AhDGAT1-2 和AhDGAT3-3 基因的表达情况.结果表明:AhDGAT1-1 基因表达峰值出现在低油低油酸品种和高油高油酸品种的荚果发育初期(下针后 30天),而在高油低油酸品种中则出现在荚果发育中期(下针后 40 天);AhDGAT1-2 基因的表达峰值出现在低油低油酸品种的荚果发育初期、高油高油酸品种和高油低油酸品种的籽仁油脂积累快速期;AhDGAT3-3 基因在3 个花生品种中的表达峰值均出现在荚果发育的中后期.推测AhDGAT1-1、AhDGAT1-2 和AhDGAT3-3 基因表达量的增加有利于花生油脂的合成与积累,但其起作用的时期存在种质差异.本研究结果可为花生高油、高油酸品种的选育提供理论依据.
关键词： 花生 二酰甘油酰基转移酶(DGAT) 实时荧光定量PCR 含油量 基因表达
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金银花炭疽病病原菌的分离鉴定和qPCR检测
《中药材 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：目的:分离鉴定金银花炭疽病病原菌,并建立该病原菌的实时荧光定量PCR(qPCR)检测体系.方法:采集金银花炭疽病病叶标本,对病原菌进行分离和纯化,利用柯赫氏法则检测病原菌的致病性,通过形态学观察结合分子生物学分析鉴定病原菌;基于病原菌的ITS序列设计特异引物和TaqMan荧光探针,并基于该病原菌特异引物的扩增产物制备重组质粒标准品,利用标准品DNA构建qPCR的标准曲线;并对建立的qPCR方法进行特异性、灵敏度和实际样本验证.结果:明确从金银花炭疽病病叶片中分离纯化的菌株为胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeos-porioides.建立的qPCR快速检测方法能够特异性检测该病原菌,灵敏度高,最低检测限为2.94×102 copies/μL,比常规PCR检测灵敏度提高100倍.实际样本验证结果显示,在20例金银花病叶中,4例为炭疽病阳性,与DNA测序结果相符.结论:本研究明确胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides为金银花炭疽病的病原菌,所建立的qPCR方法能对金银花炭疽病进行快速、准确的检测,可以为该病害的早期防治提供技术支持.
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花生脂磷酸磷酸酶基因家族的克隆与表达分析
《核农学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：为探究脂磷酸磷酸酶(LPP)基因家族在花生中的功能,本研究从花生中克隆得到8个LPP基因,分别命名为AhLPP1、AhLPP2、AhLPP4、AhLPPβ1、AhLPPβ2、AhLPPγ、AhLPPδ、AhLPPε,分别编码335、322、284、228、198、227、403和293个氨基酸,均属于LPPs蛋白质家族.随后对克隆的基因进行序列相似性比对和系统发育分析;同时通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测AhLPP基因在花生不同组织、不同发育时期、5种激素和4类非生物逆境胁迫下的表达情况.结果显示,这些基因与其他植物的LPPs蛋白有较高的相似性,可能参与花生种子油脂的合成.在5种激素与4类非生物胁迫处理下AhLPP2、AhLPPγ、AhLPPε基因均显著诱导表达,其余LPP基因在部分处理下显著诱导表达.本研究为阐明LPP类基因在花生油脂合成和逆境胁迫抗性的功能奠定了理论基础,丰富了花生品种改良的基因资源.
关键词： 花生 脂磷酸磷酸酶(LPP) 基因克隆 实时荧光定量PCR 非生物胁迫
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金针菇漆酶基因家族在不同农业废弃物培养基上表达情况
《食用菌学报 》 2021 北大核心 CSCD
摘要：测定金针菇（Flammulina filiformis）菌丝在棉籽壳、木屑、玉米芯、玉米秸秆、柠条枝条、甘蔗渣等6种农业废弃物培养基上的生长情况、漆酶活性,并通过实时荧光定量PCR方法检测漆酶基因家族11种漆酶基因表达量。结果显示:与对照（葡萄糖培养基）比较,金针菇菌丝在甘蔗渣培养基上生长速度较慢,在其他农业废弃物培养基上生长速度较快;在玉米秸秆培养基中漆酶活性最高;在棉籽壳、柠条枝条培养基上,Lac4表达量最高;在甘蔗渣培养基上,Lac4表达量较高;在木屑、玉米芯和玉米秸秆培养基上,Lac6表达量最高。
关键词： 金针菇 木质素 漆酶基因 实时荧光定量PCR 表达
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苹果β-淀粉酶基因MdBAM3的克隆和低温响应表达分析
《分子植物育种 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：淀粉酶(BAM)介导的淀粉降解广泛参与植物生长发育和非生物胁迫响应等生物学过程。从前期苹果低温诱导转录组研究中分离到1个参与淀粉代谢的差异表达基因片段,克隆其cDNA全长并进行序列分析。结果表明该基因与拟南芥AtBAM3同源,命名为MdBAM3 (GenBank登录号:KX276144.1)。该基因开放阅读框长度1 641 bp,编码546个氨基酸。该蛋白含有完整的葡萄糖基水解酶结构域,保守的葡萄糖基水解酶结构域外环和内环结构,以及2个谷氨酸催化残基,该蛋白包含40个氨基酸残基的cTP (Chloroplast transport peptides),表明MdBAM3蛋白是定位于叶绿体的β-淀粉酶。利用实时荧光定量PCR技术分析模拟低温(4℃)和自然低温条件下MdBAM3的表达响应及组织表达模式,该基因受4℃模拟低温诱导快速表达;自然低温下该基因在叶芽、花芽、韧皮部中的表达均显著上调,在叶芽中表达量最高,具有组织特异性,且随植株休眠的进行呈先升后降的趋势,推测MdBAM3在苹果低温胁迫响应中具有重要功能。
关键词： 苹果 β-淀粉酶 基因克隆 低温胁迫 实时荧光定量PCR
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禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
《畜牧与兽医 》 2019 北大核心
摘要：禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。
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鸡传染性支气管炎病毒M41株的致病性及排毒规律
《中国兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：本试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)呼吸型M41标准株的S1基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-M41 SYBR GreenⅠReal-Time PCR标准曲线。通过对8日龄SPF鸡人工感染IBV-M41发病,采用Real-Time PCR方法跟踪检测其泄殖腔排毒情况;剖检并采集试验鸡的相关器官制作病理切片;在临床观察的基础上记录试验鸡的体质量、体温等指标。结果显示,所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到28.3拷贝/μL的病毒核酸。人工感染病毒3～15 d后在鸡的排泄物中均检测到了病毒;攻毒组鸡临床症状明显,相关组织器官均呈现不同程度的病变。该病毒致病性试验、排毒规律和real-time PCR检测方法的建立,为IBV感染鸡作为实验动物模型进行相关药物的临床药效评价提供方法与依据。
关键词： real-time PCR 鸡传染性支气管炎病毒 IBV-M41 病理变化 排毒规律
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IP-10作为牛结核病诊断标志物的初步探究
《中国兽药杂志 》 2018 北大核心
摘要：为评价细胞因子IL-12 p40、IP-10和TNF-α转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。采集田间筛选的结核病阳性牛、结核病阴性牛以及牛分枝杆菌68002人工感染牛的外周血淋巴细胞,经牛结核菌素(PPDB)、重组蛋白CFP-10-ESAT-6(CE)、MPT63、PET和PBS分别刺激6 h,提取细胞总RNA,用荧光定量PCR检测IL-12 p40、IP-10、IFN-γ和TNF-α的转录水平。结果显示结核病阳性牛的外周血淋巴细胞经PPDB和CE刺激后,其IP-10的m RNA转录水平显著高于结核病阴性牛,且与IFN-γ的m RNA转录水平具有良好的相关性;初步建立牛结核病IFN-γ和IP-10的Real-time PCR检测方法,其对临床阳性样本的检出率分别为71.45%和78.57%。因此,IP-10的m RNA转录水平与牛分枝杆菌的感染相关,有作为牛结核病诊断标志物的潜力。
关键词： 牛结核病 诊断 IP-10 IFN-γ Real-Time PCR
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测定猪不同组织基因表达时RT-PCR内参基因的选择
《家畜生态学报 》 2017 北大核心
摘要：以95kg体重育肥猪的不同组织为研究对象,应用实时荧光定量PCR技术,对SDHA、HMBS、TOP2B、ACTB、B2M、PPIA、GAPDH、HPRT1、RPL4、TBP和YWHAZ共11个候选内参基因表达量进行检测,应用geNorm程序对内参基因的稳定性进行分析。结果表明,肌肉组织中稳定表达的内参基因是TBP、RPL4,心脏组织中稳定表达的内参基因是GAPDH、RPL4,肝脏组织中稳定表达的内参基因是TBP、HPRT1,脾脏组织中稳定表达的内参基因是SDHA、ACTB,肺脏组织中稳定表达的内参基因是B2M、HPRT1,肾脏组织中稳定表达的内参基因是B2M、TBP。由此可见,不同组织中最稳定表达的内参基因不同,不同组织中标准化目的基因的内参基因也不一样。
关键词： 猪 实时荧光定量PCR 内参基因选择 geNorm程序 基因表达
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小麦春化作用相关基因的时空表达特性研究
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确普通小麦春化基因的时空表达特性,以强冬性品种济麦19、冬性品种钱交麦、半冬性品种泰山1号、偏春性品种济麦20和春性品种中国春为实验材料,利用q RT-PCR技术,分析了VERNALIZATION1(Vrn1)、VERNALIZATION2(Vrn2)和VERNALIZATION3(Vrn3)的时空表达特性。结果表明在普通小麦中,Vrn1基因在四类小麦的表达量由高至低为幼穗、旗叶、普通叶片、茎秆。未春化时,冬性越强的品种,Vrn1、Vrn3基因的起始表达量越低,Vrn2基因的起始表达量越高。随着春化过程的进行,Vrn1和Vrn3基因上调表达,并在春化25 d时出现表达加速上调现象;Vrn2基因下调表达。小麦冬性越强,Vrn基因表达量变化越明显。在脱春化过程中,随着高温时间的增加,Vrn和Vrn3基因下调表达,Vrn2基因表达变化不明显。该结果为进一步分析普通小麦春化发育的分子调控机理提供了重要信息。
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