科研产出
鸡传染性支气管炎病毒山东分离株S1的测序分析及致病性
《中国兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：从山东某地疑似患肾型鸡传染性支气管炎(IB)的病死鸡的肝、肺、肾脏中分离到1株病毒,经过SPF鸡胚传代接种、血凝试验、鸡胚矮化试验、RT-PCR鉴定及测序分析、动物回归试验,确定为鸡传染性支气管炎病毒,并命名为SD/04/18株.结果显示,经3%胰蛋白酶处理后,病毒分离株有血凝性,未经处理病毒分离株不具有血凝性;鸡胚矮化试验发现该毒株明显抑制胚胎发育;进化树比对发现,该毒株与我国主要流行的QX株同源性最高,S1基因序列相似性为96.4%,氨基酸序列相似性为95.3%.分离株用SPF鸡胚连续传3代后接种8日龄SPF雏鸡,复制出了与自然病例相同的临床症状,肺、脾、肾、气管等器官出现典型病理变化.免疫组织化学法检测在气管环纤毛、肾小管上皮细胞间隙等部位可见抗原聚集.对被感染试验鸡的口腔、泄殖腔排毒进行跟踪检测,直到试验结束,被感染鸡仍有很高的病毒检出率.结果表明,最终确定该毒株为肾型鸡传染性支气管炎病毒.
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 分离 鉴定 S1基因 病理变化 免疫组化
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防治蔬菜灰霉病的生防菌SFJ1的鉴定及抑菌活性
《农药 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：[目的]为创制生物农药,对一株生防菌SFJ1进行了菌种鉴定,同时考察其抑菌活性。[方法]通过生理生化和16S rDNA基因序列分析,对生防菌SFJ1进行鉴定;通过含毒介质法和叶面喷雾法,分别测定生防菌的室内毒力和盆栽防效。[结果]生防菌SFJ1鉴定为贝莱斯芽胞杆菌,对黄瓜灰霉病室内EC_(50)和EC_(90)值分别为0.6594×10~4、36.0036×10~4 cfu/mL;经生防菌发酵原液处理后,黄瓜灰霉病的盆栽4、7 d防治效果分别为86.84%和84.09%。[结论]该生防菌具有开发成生物农药的潜力。
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山东茶园土壤几丁质降解菌的分离、鉴定及产酶特性研究
《山东农业科学 》 2018
摘要：为了筛选到适合山东茶园土壤环境的几丁质降解菌,以提高土壤几丁质的降解速率,本试验以胶状几丁质为唯一碳源,从山东省泰安市茶园土壤中筛选出两株高活性几丁质降解菌,命名为J4、J17。通过生理生化、形态观测和分子鉴定,确定J4属于鞘氨醇杆菌属,J17属于芽孢杆菌属。产酶特性研究表明,最优产酶条件菌株J4为培养温度30℃、pH值7.0、转速200 r/min,J17为培养温度25～30℃、pH值7.0、转速180 r/min;混合菌株J4+J17的产酶能力比J4、J17单一菌株的产酶能力高,分别高出9%和23%。本研究结果可为后续菌剂的制备及工厂化发酵研究奠定基础。
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乳粉中黄曲霉毒素M_1的检测能力验证
《乳业科学与技术 》 2018
摘要：设计并实施乳粉中黄曲霉毒素M_1(aflatoxin M_1,AFM_1)的检测能力验证计划,了解和评价实验室检测乳粉中AFM_1的检测能力和水平,识别实验室间存在的差异,促进实验室提高检测水平。参照CNAS—CL002《能力验证结果的统计处理和能力评价指南》制备分割水平对的样品,采用单因素方差分析和t检验对样品均匀性和稳定性进行分析。对能力验证结果进行稳健统计分析,通过Z值比分数评价实验室能力。结果表明:样品通过均匀性和稳定性的检验要求,满足能力验证计划要求;参加实验室49家,满意结果数为45家,满意率为91.8%;多数参加实验室的检测能力评价为满意,表明乳粉中AFM_1的检测水平总体良好。实验操作误差和数据处理不当是个别实验室结果离群的主要原因。
关键词： 黄曲霉毒素M1 检测 乳粉 实验室能力验证 稳健统计
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应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究
《畜牧兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求。本方法 DNA灵敏度为0.01ng,混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。
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肉鸡产业链主要抗药性菌株的分离鉴定与抗药性分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：为分析肉鸡产业链各环节主要抗药性菌株的流行状况,保证食源性公共卫生安全,本试验采集肉鸡养殖、屠宰及加工各环节的样本108份,通过6种不同含药物培养基初步筛选抗药性菌株,经VITEK2自动微生物鉴定和自动药敏检测,并与微量肉汤稀释法药敏试验进行比较。结果表明,从肉鸡产业链各环节共鉴定获得664株细菌,其中前三位的优势细菌为大肠杆菌375株(56.5%)、肺炎克雷伯菌110株(16.6%)和奇异变形杆菌79株(11.9%)。微量肉汤稀释法药敏试验结果显示,大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌对阿莫西林/克拉维酸、多西环素抗药率都在90%以上,对环丙沙星和丁胺卡那霉素抗药率在34.6%~87.0%之间,对美罗培南敏感。三种抗药菌显示多重抗药性特征,集中在三、四重抗药水平。VITEK2自动药敏试验结果显示,大肠杆菌对氨苄西林、头孢唑啉抗药率分别是98.3%、92.6%;全部对厄他培南、亚胺培南敏感。肺炎克雷伯菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦抗药率分别是97.3%、89.1%;大部分对厄他培南和亚胺培南敏感,肺炎克雷伯菌的抗药性水平普遍稍高于大肠杆菌,二者呈正相关性。微量肉汤稀释法和VITEK2自动药敏试验两种方法重叠使用了环丙沙星和丁胺卡那霉素,检测结果差异不显著。肉鸡产业链各环节大肠杆菌的抗药性显著高于EUCAST数据库的结果,建议相关部门应加强细菌抗药性监测,并逐步降低抗药性,保障食品安全和公共卫生。
关键词： 肉鸡 抗药性 大肠杆菌 肺炎克雷伯菌 鉴定 药敏试验
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黄曲霉毒素B_1降解菌株的筛选及鉴定研究
《食品研究与开发 》 2018 北大核心
摘要：黄曲霉毒素B_1(aflatoxin B_1,AFB_1)污染花生、玉米等农产品和食品,具有极强的毒性和致癌性。采用香豆素为唯一碳源从海水中分离降解AFB_1菌株,其中菌株M8能降解71.8%的AFB_1。通过上清液、菌悬液、胞内液降解AFB_1分析,初步判断菌株M8分泌至胞外的活性物质主导AFB_1的生物降解作用。通过菌株形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因系统发育学分析,鉴定菌株M8属于假单胞菌属,命名为Pseudomonas sp. M8。从海水中分离菌株M8丰富了降解AFB_1降解微生物资源,为研究其作用机理和应用于黄曲霉毒素的脱毒奠定了基础。
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副猪嗜血杆菌脂多糖的提取、鉴定及初步应用
《中国动物检疫 》 2018
摘要：为建立一种有效提取高纯度副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)的方法,进一步阐明HPS的致病机制,通过热酚水法提取LPS,浓缩后,采用酶解法和超离法纯化提取物,分别用硫酸-苯酚法、BCA法、紫外分光光度法,测定LPS提取物中多糖、蛋白及核酸的含量,通过SDSPAGE电泳银染方法鉴定提取物。将提取的LPS作用于猪肺泡巨噬细胞,通过荧光定量方法检测IL-1β的表达量差异。结果显示:纯化的LPS平均产率为2.56%;LPS提取物中不含还原性单糖,多糖含量为3.27%,蛋白含量为0.77%,核酸含量为0.90%;提取的LPS能够引起猪肺泡巨噬细胞IL-1β表达量显著上调。因此,通过该方法提取纯化的LPS可以用于HPS与宿主细胞间作用机制的研究。
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