科研产出
甜樱桃病毒病分子检测技术的研究
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立简便、快速、高效、准确的甜樱桃病毒分子检测方法。【方法】根据我国甜樱桃病毒病害的发生特点,先后建立和完善了几种主要病毒的单重RT-PCR、多重RT-PCR、纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法,并对各检测方法的适用范围、检测效率进行比较分析。【结果】改进后的单重RT-PCR方法利用随机引物反转录得到的c DNA模板可同时用于多种病毒的特异性检测。多重RT-PCR方法可在同一管PCR反应中同时检测多种病毒。运用纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法在植物病毒核酸提取环节简化了操作程序。【结论】该检测技术体系已应用于山东地区甜樱桃及中国樱桃等大批量植物样本的病毒检测工作之中,检测结果稳定、可靠。
关键词： 甜樱桃 病毒 检测 RT-PCR 多重RT-PCR 纳米磁珠
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不同砧木甜樱桃品种‘红灯’皱叶病树体内的病毒检测
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】初步探明患有皱叶病的甜樱桃树体内是否感染病毒,为皱叶病的分子生物学鉴定及综合防治提供可靠的科学依据。【方法】以嫁接在3种不同砧木上的甜樱桃品种‘红灯’叶片为试验材料,提取植物样本总RNA,采用随机六聚体引物反转录,选取10种甜樱桃病毒作为检测对象,根据各病毒基因组序列设计特异引物,进行RT-PCR检测。【结果】10种甜樱桃待检病毒中,5种病毒检测结果呈阳性,分别为PNRSV、PDV、CVA、CGRMV、LCh V-2。各皱叶病甜樱桃样品均至少同时感染2种病毒,多病毒复合感染比例较高。【结论】甜樱桃皱叶病树体内确有病毒存在,但关于病毒是否是引起皱叶病的原因还有待进一步验证。
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人抗凝血酶Ⅲ的表达及其抗血清的制备
《细胞与分子免疫学杂志 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：目的用大肠杆菌系统表达重组的抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ),制备其抗血清并测定效价。方法利用基因克隆技术获得AT-Ⅲ基因片段,构建原核表达质粒pET32a(+)-AT-Ⅲ,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,IPTG诱导表达、蛋白纯化并免疫兔,间接ELISA、Western blot法检测抗血清。结果 SDS-PAGE、Western blot法检测原核表达蛋白结果显示,在相对分子质量(Mr)77 000附近出现特异性条带。对该融合蛋白进行分离纯化后免疫新西兰兔,制备AT-Ⅲ抗血清,间接ELISA方法检测抗血清的最高效价可达到1∶12 800,Western blot分析表明抗血清可与293T、CHO细胞表达的AT-Ⅲ蛋白及AT-Ⅲ蛋白纯品特异性结合。结论成功制备了人抗凝血酶Ⅲ抗血清。
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实时光电微生物法快速检测生鲜乳中的嗜冷菌
《现代食品科技 》 2012
摘要：对50份生鲜牛乳样品中的嗜冷菌同时采用实时光电微生物快速检测方法和平板计数法进行检测,分析比较两种检测方法所得的嗜冷菌检测数据。结果表明:采用嗜冷菌检测标准曲线:Lg CFU/mL=-0.417*DT+7.91的实时光电微生物法检测的嗜冷菌含量在2.3~3.7×106CFU/mL,检出时间在3.2~18.1 h。采用平板计数法的检出结果范围在4.0~3.0×106CFU/mL。当实时光电微生物检测方法的检出时间大于18 h时,样品检测结果均为未检出,此时平板计数法的检测结果均为<1 CFU/mL。实时光电微生物法检测结果对数值与平板计数法检测结果对数值的差值范围在-0.9~0.8,两者差值的绝对值均<1。采用实时光电微生物法和平板计数法两种检测方法的检测结果相当吻合,实时光电微生物法检测生鲜牛乳中嗜冷菌具有良好的适用性,可大大缩短检测时间,且方法准确、简便易行。
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入侵害虫西花蓟马检测及其防治策略
《山东农业科学 》 2012
摘要：西花蓟马(Frankliniella occidentalis Pergande)是国际上备受关注的检疫性有害生物,近年来该虫分布范围不断扩大,对农作物、园林园艺植物的危害日趋加重。本文对检测和鉴定西花蓟马的形态鉴定法、PCR法和芯片检测法进行了比较和分析。随着检测技术的发展及研究趋势,基因芯片检测法将是未来检测的新手段。在此基础上提出了主要采取生物防治结合农业防治,在种群数量未达到经济阈值时最好不使用杀虫剂的防治策略,降低杀虫剂对西花蓟马的选择压,从而达到科学治理的目的。
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液相色谱—串联质谱法测定动物源性食品中4种β_2~-受体激动剂类药物残留
《农产品加工(学刊) 》 2012
摘要：建立了动物源性食品中4种β2-受体激动剂克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇和特布他林的高效液相色谱—串联质谱测定方法。样品经5%的三氯乙酸酸解提取,Waters Oasis MCX固相萃取柱净化,然后用Aglient ZORBAXSB-Aq(3.5μm,3.0 mm×100 mm)色谱柱分离,以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,基质匹配标准溶液内标法定量。结果表明,4种β2-受体激动剂在质量浓度1.0~100 g/L内呈良好的线性关系,相关系数R均大于0.995 0;检出限(S/N≥3)均为0.1μg/kg,定量下限(S/N≥10)为0.25 g/kg,在0.5,2,5μg/kg3个质量分数添加水平,回收率在81%~108%,相对标准偏差在1.3%~9.4%。方法灵敏度高、定性准确可用于各种动物源性食品中4种β2-受体激动剂残留的快速检测。
关键词： β2-受体激动剂 动物源性食品 检测 HPLC-MS
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酶联免疫吸附法快速检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇
《农产品加工(学刊) 》 2011
摘要：应用ELISA法快速检测麦类、谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为10μg/L,检测范围为10-1 000μg/L。用10%甲醇水溶液提取含DON的小麦及玉米样品,回收率为86～93%,变异系数为4.1%～17.4%。
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山东省葡萄几种主要病毒病调查及检测研究
《北方园艺 》 2011 北大核心
摘要：对采自山东省不同葡萄园类别的葡萄样品,采用PTA-ELISA法和Dot-ELISA法对葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)进行了检测,采用DAS-ELISA法对葡萄卷叶病的3个毒原(GL-RaV-1-、2-、3)进行了检测。GRSPaV检测结果表明:检测的61个品种518个样品,阳性样品率33.6%,阳性品种率73.8%,其中资源圃样品阳性率32.7%,生产园样品阳性率34.0%。对检测到阳性样品辅以RT-PCR法验证,2对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340 bp片段、CP基因842 bp片段。GLRaV-1-、2-、3的检测结果表明:鲜食品种3种病原的阳性样品率分别为33.7%、7.1%、62.2%,酿酒品种阳性样品率分别为35.1%、16.2%、54.1%,综合3种病毒的阳性样品率为76.3%,品种感染率87.7%。通过该类研究对推动国内葡萄无毒化生产有重要意义。
关键词： 葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV) 葡萄卷叶病毒-1■2■3(GLRaV-1■2■3) 检测 山东
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