科研产出
创伤弧菌溶血素基因vvhA质粒定性标准样品的研制及其在水产品检测中的应用
《山东农业科学 》 2024
摘要：针对我国缺乏适用于创伤弧菌检测的质粒标准样品的现状，本研究开展了创伤弧菌鉴定即用型定性质粒标准样品的研制和应用工作。首先构建了创伤弧菌毒力基因vvhA的重组质粒，经测序验证后制备成质粒标准样品冻干粉，然后对其进行PCR定性检测及紫外分光光度计法定量分析。均匀性检验结果表明，样品间无显著差异，均匀性良好，符合预期目标；短期稳定性检验结果表明，样品能在4℃、37℃条件下稳定保存14天；长期稳定性检验结果表明，样品能在-20℃条件下稳定保存至少12个月。研究结果表明，创伤弧菌质粒定性标准样品的均匀性和稳定性均符合国家定性标准样品的要求，为创伤弧菌的快速、高通量的定性鉴定分析提供了可靠的参考物质。将标准样品应用于鱼类、贝类等10份海鲜类食品样品的检测中，经传统培养法验证，检测结果准确无误。本研究所研制的创伤弧菌质粒定性标准样品具有较好的商业应用潜力，为其在食品检测领域的推广应用奠定了重要基础。
全文链接
请求原文
鸭冠状病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《病毒学报 》 2023 北大核心 CSCD
摘要：为建立一种鸭冠状病毒(Duck coronaviruses,DuCoV)的临床快速诊断方法,根据鸭冠状病毒1b基因保守区域设计特异性引物,成功建立了用于检测鸭冠状病毒的特异性SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法.该方法特异性强、敏感性高、重复性好,对鸭冠状病毒有特异性扩增,最低检测限为8.04×100拷贝/μL,比普通PCR方法敏感10倍,批内变异系数与批间变异系数分别为0.28%~0.34%、0.25%~0.36%,均小于1%.对临床可疑鸭泄殖腔拭子进行检测,本方法与常规PCR方法的检测结果阳性符合率为100%,阴性符合率为96.43%,样本总符合率为97.62%.本研究建立的鸭冠状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法,可用于鸭冠状病毒的临床快速诊断及流行病学监测.
关键词： 鸭冠状病毒 检测 SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR
全文链接
请求原文
葡萄根癌病研究进展及防治措施
《中外葡萄与葡萄酒 》 2022 北大核心
摘要：葡萄根癌病由葡萄土壤杆菌(Allorhizobium vitis)引起,主要通过伤口侵染,促使植物细胞产生过量的生长激素,从而形成瘤状物,影响植株的营养吸收,进而降低葡萄产量和品质.本文综述了葡萄根癌病的发病症状、病原菌种类、病原菌的基因组信息及分类地位,比较分析了基于特异性引物建立的葡萄土壤杆菌的PCR、荧光定量PCR、数字微滴PCR、环介导等温扩增技术等分子生物学检测技术的优缺点,阐述了病原菌的发病机制及对该病的综合防治方法,为葡萄根癌病的后期研究及生产防治提供参考.
全文链接
请求原文
H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用
《病毒学报 》 2022 北大核心 CSCD
摘要：H13亚型禽流感病毒以往只在海鸥、鸭等水禽中被发现,2018年,我们实验室报道了蛋鸡感染H13亚型禽流感病毒的证据,表明H13亚型禽流感病毒存在从水禽中溢出感染陆禽的风险,因而有必要加强对H13亚型禽流感病毒的监测。实时荧光定量PCR由于具有特异性强、灵敏度高、检测时间短等优点,在病原监测工作中得到了广泛应用。本研究以H13亚型禽流感病毒的HA基因作为靶基因,设计了一对特异性荧光定量PCR检测引物,通过特异性试验、敏感性试验等,建立了H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法,并应用建立的检测方法对海鸥粪便样品进行核酸检测。实验结果发现,该检测方法的灵敏度为1.60×10~0拷贝/μL;该检测方法对H1、H3、H5、H6、H7和H9等6个亚型的禽流感病毒无交叉反应;该检测方法的敏感性是常规PCR的10倍;海鸥粪便样品中H13亚型禽流感病毒的核酸检测阳性率为18.8%。我们建立的H13亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法具有灵敏度高、特异性强等特点,该检测方法可用于大量临床样品的快速检测,为H13亚型禽流感病毒监测工作的顺利开展提供了技术支撑。
关键词： H13亚型禽流感病毒 荧光定量PCR 检测 HA基因
全文链接
请求原文
52.5%抑快净水分散剂在番茄中的残留检测及消解动态研究
《山东农业科学 》 2021
摘要：抑快净由霜脲氰及恶唑菌酮混配而成。本试验采用高效液相色谱（HPLC）法,对52.5%抑快净水分散粒剂中霜脲氰及恶唑菌酮在番茄中的残留进行检测分析。结果表明在0.01～1.0 mg/kg范围内,番茄中霜脲氰的平均回收率为79.5%～92.8%,相对标准偏差为3.68%～7.36%;在0.01～2.0 mg/kg范围内,番茄中恶唑菌酮的平均回收率为82.4%～103.9%,相对标准偏差为2.96%～6.25%。该方法的准确性、精确性以及灵敏度均达到农药残留分析的要求。霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的消解动态均符合一级动力学特征,并且恶唑菌酮的降解速率快于霜脲氰。霜脲氰和恶唑菌酮在番茄中的最终残留量符合我国最大残留限量标准。
全文链接
请求原文
鸭乙型肝炎病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用
《中国动物传染病学报 》 2021
摘要：本研究根据鸭乙型肝炎病毒（DHBV）基因组C基因序列设计一对特异性引物,建立一种快速检测DHBV的SYBR Green荧光定量PCR方法。该方法在7.8×102 copies/μL～7.8×108 copies/μL模板量时,呈现良好的线性关系,相关系数R2为0.999。利用该方法对来自山东不同地区的95份临床样品进行检测。结果显示,该方法特异性好,临床样品检测阳性率与常规PCR方法的符合率为97.9%,且灵敏度高于普通PCR约100倍。将该方法应用于DHBV感染雏鸭的动力学研究,结果表明,DHBV感染雏鸭11 d时病毒含量达到高峰,随后逐渐下降。该方法的建立不仅为临床提供一种对DHBV的快速准确的检测方法,也为药物有效评价时间点的选择提供了理论依据。
全文链接
请求原文
高效液相色谱-串联质谱检测小麦中噻虫胺残留量
《现代农药 》 2019
摘要：建立了高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)快速检测小麦及其秸秆中噻虫胺残留。样品经乙腈提取,C_(18)吸附剂净化,多反应监测模式检测,基质匹配标准品外标法定量。当质量浓度为0.01～1 mg/L时,噻虫胺在基质中的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.999 3～0.999 9。在0.02～1 mg/kg添加水平下,噻虫胺在小麦、最终秸秆和青秸秆中的平均回收率为87%～105%,相对标准偏差为2%～18%。噻虫胺在小麦中的定量限为0.02 mg/kg。该方法简便、快速、准确,可用于小麦中噻虫胺的残留检测。
关键词： 噻虫胺 小麦 残留 检测 高效液相色谱-串联质谱法
全文链接
请求原文
