科研产出
新型鸭呼肠孤病毒山东株的分离鉴定及致病性分析
《中国兽医杂志 》 2021 北大核心
摘要：本试验采用病毒分离培养、RT-PCR扩增、测序分析、致病性试验等方法,以探索山东菏泽地区商品肉鸭养殖场内樱桃谷鸭脾脏坏死、瘸腿症状的病因。结果显示,鸡胚培养发病鸭的肝脏和脾脏组织悬液分离出1株病毒;该病毒株S1基因与新型鸭呼肠孤病毒的同源性为94%～96%,与鹅呼肠孤病毒的同源性为95%,与番鸭呼肠孤病毒的同源性为49%～50%,与禽呼肠孤病毒同源性为44%～48%,从而确定该病毒株为新型鸭呼肠孤病毒;该病毒株经尿囊腔接种于7日龄SPF鸡胚后,胚体在72～96h内集中死亡,出现水肿、出血症状;该病毒株在Vero细胞上可产生明显的空泡化病变;该病毒株在1日龄雏鸭可回归出与临床一致的脾脏坏死,攻毒后第8周,可观察到50%的鸭发生瘸腿,同时肌肉和关节处可剖检到干酪样物。由此判断,新型鸭呼肠孤病毒感染是导致该养殖场鸭脾脏坏死和瘸腿的主要原因。
关键词： 新型鸭呼肠孤病毒 脾脏坏死 瘸腿 分离鉴定 RT-PCR
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山东省葡萄主要病毒病的分布及病原鉴定
《山东农业科学 》 2019
摘要：葡萄病毒病严重影响葡萄的产量和品质,是制约葡萄产业发展的重要因素。为明确该病害在山东省的最新分布状况及病原种类,2016—2018年采用田间调查结合RT-PCR检测等方法对山东省葡萄主要病毒病进行了研究。结果表明,186份样品中共检出GLRaV-1、GLRaV-3、GRSPaV、GFLV、GFkV 5种病毒,检出率分别为18.82%、9.68%、16.67%、1.61%、33.87%,且复合侵染发生普遍,检出率为16.67%;树龄较大的葡萄园以GLRaV-1、GLRaV-3病毒侵染为主,新建葡萄园以GRSPaV、GFkV病毒侵染为主。研究结果可为山东省葡萄病毒病的早期预防提供理论指导。
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玉米ZmcpSRP54基因可变剪接分析
《山东农业科学 》 2019
摘要：cpSRP54基因在植物叶绿体发育中发挥重要作用.本研究用生物信息学方法对玉米ZmcpSRP54蛋白进行了进化分析,利用RT-PCR方法对玉米ZmcpSRP54基因全长cDNA进行了克隆,进而对其进行可变剪接分析.结果表明,玉米ZmcpSRP54蛋白与其它7个物种的cpSRP54蛋白有很高的相似性.鉴定到玉米ZmcpSRP54基因25个不同转录本,1个为标准剪接转录本,其它24个为可变剪接转录本.24个可变剪接转录本共使用了17种非标准剪接位点,4种可变剪接方式,主要以可变的3′端位点、可变的5′端位点和外显子跳跃3种可变剪接方式为主.预测出18种不同长度的ORF,编码18种不同长度的多肽.11个多肽其保守结构域氨基酸序列发生部分缺失,6个多肽其保守结构域氨基酸序列发生全部缺失,1个编码全新的多肽.这些结果将为玉米ZmcpSRP54基因的功能研究提供重要信息.
关键词： 玉米 ZmcpSRP54基因 RT-PCR 可变剪接
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甘薯淀粉合成相关酶基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为研究甘薯块根淀粉合成酶基因的表达特征,本研究以淀粉含量不同的两个品种为试验材料,利用转录组数据克隆了甘薯颗粒结合淀粉合成酶GBSS、异淀粉酶ISA、淀粉分支酶SBEⅠ、SBEⅡ的cDNA片段,采用实时荧光定量RT-PCR方法对块根不同生长期淀粉合成相关酶基因的表达进行研究。结果表明,在甘薯不同生长时期,淀粉含量从块根形成期开始逐渐积累,到栽插后80 d、110 d时达到高峰,在块根膨大后期,淀粉含量相对稳定。IbGBSSⅠ、IbSBEⅡ、IbISA 3个基因表达量呈双峰曲线变化,IbSBEⅠ表达呈单峰曲线变化。IbGBSSⅠ、IbISA在栽插后70 d和100 d时表达量达到高峰,IbSBEⅠ在栽插后70 d表达量达到最大。在不同类型甘薯品种中,IbGBSSⅠ在高淀粉品种‘漯徐薯8号’中的表达量显著高于‘郑薯20’,低淀粉品种‘郑薯20’的IbISA表达量显著高于‘漯徐薯8号’。
关键词： 甘薯(Ipomoea batatas L.) 淀粉合成相关酶基因 克隆 荧光定量 RT-PCR 基因表达
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鹅星状病毒LAMP快速检测方法的建立与应用
《中国预防兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：鹅星状病毒是一种新发的可导致雏鹅以痛风为主要特征的传染性病原。为建立鹅星状病毒(AstV)的快速检测方法,本研究根据鹅Ast V ORF1b基因的保守序列设计了一组特异性的LAMP引物,建立鹅AstV的LAMP快速检测方法,并检测其特异性和灵敏度。结果显示:建立的LAMP方法的最佳反应温度为64℃;仅能扩增鹅Ast V,而对鹅细小病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒及鹅源H9N2亚型禽流感病毒均不能扩增;能够检测到的最低模板(cDNA)浓度为1 ng/μL,因此该方法具有较好的特异性和敏感性。临床样品检测结果显示:建立的LAMP方法与RT-PCR方法阳性符合率为95.65%。综上,本研究建立的LAMP方法能够特异、快速地检测新发鹅Ast V,为养殖基地、科研和检验检疫部门提供了一种快速检测该病原的技术手段。
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株。通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%。本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考。
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014-2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率.结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株.通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%.本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考.
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
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H9N2亚型禽流感荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用
《黑龙江畜牧兽医 》 2017 北大核心
摘要：为了研究H9N2亚型禽流感病毒(AIV)在家禽体内各个器官的分布,试验针对H9N2亚型AIV的HA基因设计1对特异性引物,同时设计1对扩增内参基因β-actin的引物,以阳性重组质粒作为标准品做标准曲线,建立荧光定量RT-PCR检测方法,并对人工感染H9N2的SPF雏鸡气管、胸腺、肺脏、肝脏、脾脏、肾脏、肠等器官进行3次重复检测。结果表明:该法线性关系R值均在0.99以上,检测极限均为10拷贝质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性好,批内和批间重复性试验变异系数均小于1%。通过比较各器官HA相对表达量,得出肠和胰腺中HA相对表达量最高,腺胃次之,脾脏、肝脏、胸腺、法氏囊中含量也比较高,气管、肺脏、肾脏中含量较低,其中肾脏含量最低。说明研究建立的H9N2亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR方法灵敏度高,特异性强。
关键词： H9N2亚型禽流感病毒 HA基因 RT-PCR 检测 病毒分布
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石榴果皮POD基因的克隆与序列分析
《山东农业科学 》 2017
摘要：本研究以‘泰山红’石榴果实为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆果皮中POD基因cDNA片段,利用BLAST和ORF Finder分析其核苷酸序列,并利用Prot Param、SPOMA、DANMAN等软件分析其氨基酸序列。结果表明,克隆得到1 092 bp的cDNA片段,该基因含828 bp的CDS序列,编码276个氨基酸。该基因核苷酸序列与烟草、茜草、花生二倍体杂生种和潘那利番茄等植物的相似性分别为77%、77%、76%和76%;氨基酸序列与荔枝、克莱门柚、苹果和白梨的相似性分别为89%、87%、84%和84%;Gen Bank登录号为KY129694。预测蛋白质理论分子量为30 582.59 D,等电点(p I)为8.83,具有过氧化物酶完整的保守结构域,含有Cd00693和Cl00196两个保守功能域,为亲水性蛋白;蛋白质二级结构主要由无规则卷曲(38.41%)、α-螺旋(37.68%)、延伸链(13.77%)和β-转角(10.14%)组成。该研究结果为揭示石榴果实褐变机理奠定了理论基础。
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