科研产出
我国口蹄疫流行血清型RT-PCR鉴别诊断技术的建立
《中国病原生物学杂志 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：目的建立口蹄疫流行株不同血清型RT-PCR的鉴别诊断技术,为有效防控口蹄疫提供技术支撑。方法根据GenBank中的A型、O型、Asia1型口蹄疫病毒的全基因组核酸序列,用Primer 5.0设计该3型口蹄疫病毒的通用引物及特异性分型引物,建立RT-PCR方法,采用1%琼脂糖凝胶电泳结合测序技术对引物的特异性和广谱性进行分析。结果 1%琼脂糖电泳结果表明通用引物P1/P2能同时特异性扩增A、O、Asia1型口蹄疫病毒,扩增片段大小为457bp,与预期值相一致。A、O、Asia1型分型引物只能扩增相应亚型口蹄疫病毒的目的基因片段(大小分别为320、240和460bp),与预期值相一致。不能扩增其他2种亚型。Blast比对显示分型引物扩增产物序列经测序验证与其亚型完全对应,同源性为84%~99%。结论建立的RT-PCR诊断技术对口蹄疫病毒通用型扩增具有广谱性,对基因亚型分型具有特异性,可用于口蹄疫病检测及其流行病学调查。
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河北省设施番茄褪绿病毒分子检测和鉴定研究
《北方园艺 》 2015 北大核心
摘要：以2014年夏季在河北7个县市设施番茄种植区田间采集的疑似番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)感病植株为试材,采用RT-PCR检测、BLAST比对和MEGA 5.0系统树分析等方法,研究河北设施番茄上ToCV的发生和分子鉴定以及ToCV与另一种严重发生的番茄黄化曲叶病毒(Tomato yellow leaf curl virus,TYLC)复合侵染情况。结果表明:以ToCV外壳蛋白(Coat Protein,CP)和热激蛋白(Heat Shock Protein 70,HSP70)共3对特异引物对其中4个典型地区ToCV疑似样品进行检测,分别扩增到约1 032、943、911bp的特异条带,同时针对ToCV阳性样品利用TYLCV特异引物从部分样品中扩增得到约833bp的核苷酸序列,4个样品均确定为ToCV阳性,样品与ToCV北京分离物(KC887999)CP基因序列一致性最高,为99.7%,同时确定田间存在ToCV和TYLCV复合侵染。
关键词： 番茄褪绿病毒 HSP70 CP RT-PCR检测 番茄黄化曲叶病毒 复合侵染
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甜樱桃病毒病分子检测技术的研究
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立简便、快速、高效、准确的甜樱桃病毒分子检测方法。【方法】根据我国甜樱桃病毒病害的发生特点,先后建立和完善了几种主要病毒的单重RT-PCR、多重RT-PCR、纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法,并对各检测方法的适用范围、检测效率进行比较分析。【结果】改进后的单重RT-PCR方法利用随机引物反转录得到的c DNA模板可同时用于多种病毒的特异性检测。多重RT-PCR方法可在同一管PCR反应中同时检测多种病毒。运用纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法在植物病毒核酸提取环节简化了操作程序。【结论】该检测技术体系已应用于山东地区甜樱桃及中国樱桃等大批量植物样本的病毒检测工作之中,检测结果稳定、可靠。
关键词： 甜樱桃 病毒 检测 RT-PCR 多重RT-PCR 纳米磁珠
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一起鸭甲肝病毒1型和3型混合感染的研究报道
《家禽科学 》 2014
摘要：自山东省某疑似鸭肝炎发病鸭肝脏中分离到两株病毒,命名为TA1和TA2,分离毒分别回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。利用鸭甲肝病毒1型(DHAV-1)和3型(DHAV-3)特异性引物进行RT-PCR扩增,结果为阳性,经测序证实为DHAV-1和DHAV-3。分别扩增分离毒的VP1基因,经序列测定及遗传进化关系分析发现,分离毒TA1和DHAV-3毒株之间有较高的核苷酸序列相似性,与DHAV-3遗传距离最近,属于基因C型;分离毒TA2和DHAV-1毒株之间有较高的核苷酸序列相似性,与DHAV-1的遗传距离最近,属基因A型。
关键词： 鸭甲肝病毒1型 鸭甲肝病毒3型 分离 RT-PCR 混合感染
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槭树叶片类黄酮糖基转移酶基因RT-PCR扩增体系优化
《山东农业科学 》 2013
摘要：以槭树"秋天火焰"变色期秋季叶片为试材,采用改良CTAB法提取叶片总RNA,利用GenBank中相关物种的UFGT基因序列设计特异引物,进行RT-PCR扩增并对RT-PCR反应体系中的引物、退火温度和循环次数进行优化,建立了槭树叶片UFGT基因的RT-PCR扩增反应体系。
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山东水稻黑条矮缩病毒dsRNA提取与RT-PCR检测研究
《山东农业科学 》 2012
摘要：水稻黑条矮缩病是由灰飞虱和白背飞虱等传播的病毒性病害,给水稻生产带来严重危害。通过提取水稻黑条矮缩病毒dsRNA发现,感病植株的dsRNA凝胶电泳存在8条带,而健康植株是空白结果,与报道的玉米粗缩病毒结果相同。根据水稻黑条矮缩病毒基因组序列的信息,在其S1和S10片段分别设计合成两对引物,对感染病毒植株和健康植株进行扩增,可在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病毒基因组特有的条带,而在健康植株中未能扩增出条带。利用此种方法可以建立水稻黑条矮缩病检测体系,对水稻黑条矮缩病进行早期检测和预报。
关键词： 水稻黑条矮缩病 dsRNA 病毒检测 RT-PCR
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甜樱桃李矮缩病毒(PDV)RT-PCR检测方法的优化与应用
《中国植保导刊 》 2012 北大核心
摘要：以甜樱桃(Prunus avium L.)品种红灯的叶片为材料,提取总RNA,选用随机六聚体引物进行反转录合成cDNA,根据李矮缩病毒外壳蛋白基因设计2对特异引物,分别从感病样品中扩增出与预期片段大小相符的目的片段。通过对RT-PCR反应体系中引物、模板浓度和退火温度的优化,改进了现有的李矮缩病毒的RT-PCR检测方法,并成功用于山东泰安地区甜樱桃果园的病毒调查。另外,还可以扩增18 sRNA,实现对李矮缩病毒外壳蛋白基因表达的相对定量分析。
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山东地区樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)的RT-PCR检测及外壳蛋白基因的克隆
《山东农业大学学报(自然科学版) 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为调查我省甜樱桃感染樱桃绿环斑驳病毒(Cherry Green Ring Mottle Virus,CGRMV)情况,本研究以甜樱桃(Prunus avium L.)品种"红灯"叶片总RNA为模板,根据CGRMV基因组序列设计特异引物,对山东地区37份甜樱桃"红灯"样品进行RT-PCR检测,共检测出19份阳性样品。利用CGRMV外壳蛋白基因序列引物,从阳性植物样本中分离到约800 bp的目的片段,克隆测序,序列分析显示该片段全长807 bp,编码268个氨基酸,与GenBank中已登录的CGRMV分离物的外壳蛋白基因序列一致性为87%～97%,氨基酸序列相似性为95%～99%。该结果表明山东地区甜樱桃生产园中感染CGRMV的病例较为普遍。
关键词： 甜樱桃 樱桃绿环斑驳病毒 RT-PCR检测 外壳蛋白 基因克隆
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