科研产出
鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立与初步应用
《广东农业科学 》 2007 CSCD
摘要：根据GenBank中Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒(DHV-Ⅰ)的基因序列设计、合成引物,以山东、江苏、广东等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,得到预期大小的目的片段。将山东分离株扩增的目的片段克隆到pGM-T载体,酶切鉴定得到阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定,与参考毒株R85952的序列比较发现,山东分离株与参考序列的同源性为97.4%。试验结果表明,所建立的RT-PCR方法最低模板检出量为100 pg,且该方法只能特异地检测出DHV,不能检出鸭瘟病毒、小鹅瘟病毒、鹅副粘病毒和番鸭细小病毒等。自然感染病料的检测分离结果表明,该方法既可用于DHV-Ⅰ分离株的快速鉴定,也可用于临床感染病例的检测与诊断。
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猪肌肉组织LPL基因表达的发育性变化及其与肌内脂肪沉积关系的研究
《畜牧兽医学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：以40-90 kg 6个体重组的莱芜猪和鲁莱黑猪共72头去势公猪为试验对象(每组6头),采用相对定量RT-PCR方法,以-βactin基因为内标,分析肌肉组织LPL基因表达的发育性变化及其与肌内脂肪沉积的关系。结果表明:莱芜猪与鲁莱黑猪肌肉组织中LPL基因表达的发育性变化趋势基本相似,随体重的增长,莱芜猪50-70kg阶段LPLmRNA表达丰度逐渐下降(P<0.05),80 kg阶段迅速回升出现一个峰值后再次下降;鲁莱黑猪LPLmRNA表达丰度随体重的增加呈缓慢下降趋势,70 kg以后变化不大并维持较低水平,其前期(40-60 kg)与后期(70-90 kg)的表达量差异显著(P<0.05)。总体上莱芜猪肌肉组织LPL基因表达量略高于鲁莱黑猪(P>0.05)。相关分析表明,莱芜猪和鲁莱黑猪肌内脂肪相对含量与肌肉组织LPLmRNA表达的发育性变化分别呈显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)的正相关。研究结果提示:猪肌肉组织LPL是肌内脂肪沉积的重要参与者,其编码基因的表达具有明显的体重发育特征,并对肌内脂肪的沉积具有一定程度影响。
关键词： 莱芜猪 肌内脂肪 LPLmRNA 发育性变化 RT-PCR
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Ⅰ型鸭病毒性肝炎病毒RT-PCR检测方法的建立
《家禽科学 》 2006
摘要：根据Genebank中I型鸭病毒性肝炎病毒的基因序列,设计合成了2对引物,以山东、江苏、广东、河南等地分离株的RNA为模板进行RT-PCR扩增,均得到预期大小的目的片段,两对引物的检测结果一致。并对其中一种方法的敏感性、特异性进行了检测,结果表明本试验建立的用于I型鸭病毒性肝炎病毒诊断的RT-PCR方法具有较高的敏感性和特异性,最低RNA模板检出量为100pg,只能特异的检测出I型DHV,不能检出NDV、IBDV、DPV和GPV。因此,所建立的RT-PCR检测技术具有特异、快速和敏感的特点,可用于鸭病毒性肝炎病毒的快速鉴别诊断。
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应用RT-PCR和病毒学方法检测低致病力禽流感感染的研究
《山东农业科学 》 2006
摘要：分别应用病毒分离和鉴定试验以及禽流感病毒(AIV)型特异性RT-PCR技术,对疑似H9亚型AIV感染的10份病死鸡组织病料进行了实验室诊断。结果有7份病例用上述两种方法检测均为阳性;2份病料仅分离到H9亚型AIV;1份病例仅H9亚型RT-PCR阳性。研究表明,对于H9亚型AIV临床组织样品的检测,病毒分离试验的敏感度高于RT-PCR。当检测因运输或消毒药物作用而导致病料中病毒死亡的H9亚型AI临床病例时,RT-PCR有明显的优势。将RT-PCR和病毒分离鉴定两种方法相结合,可提高临床样本的H9亚型AIV的检出率。
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半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立
《中国人兽共患病学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：目的根据牛轮状病毒的VP7基因设计了一对可以检测牛轮状病毒G6血清型的引物,成功地检测了牛轮状病毒G6血清型。使用该方法检测牛病毒性腹泻-粘膜病病毒,检测结果为阴性。敏感性试验表明本实验方法可以检测10-4稀释的样品。通过对23份临床样本的检测证实,PCR方法比聚丙烯酰胺凝胶电泳和病毒的分离试验灵敏度高,可以快速诊断轮状病毒病,并且能够同时鉴定轮状病毒主要血清型。
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牛白细胞介素18成熟蛋白cDNA基因的克隆和表达
《畜牧兽医学报 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：应用RT-PCR技术分别从脂多糖(LPS)活化的牛脾脏细胞和肺泡巨噬细胞中克隆到编码牛白细胞介素(bIL-)18成熟蛋白的cDNA基因,其大小为480 bp。将bIL-18克隆到pET32a(+)质粒中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,得到了分子量为38ku的融合蛋白,该蛋白经纯化并复性后,具有诱导MDBK分泌IFN-γ的活性,并且可以刺激ConA活化的外周血单核细胞(PBMC)增殖。使用半定量RT-PCR对其mRNA的体内表达进行了测定,发现不论是否加入刺激剂,牛巨噬细胞都可以持续的表达IL-18 mRNA,但是被LPS活化的PBMC只有微弱表达,肝和脾细胞经LPS活化后也可以检测到IL-18 mRNA的表达,其水平明显高于PBMC,在不同细胞中表达的差异可能反映了其产生成熟IL-18的能力。
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马铃薯S病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
《园艺学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：以田间采集的马铃薯病叶中提取的马铃薯病毒S(PVS)总RNA为模板,通过RT-PCR获取长度为890 bp的PVS-cp的cDNA,克隆至pGEM-T载体上。酶切回收该基因片段,并构建了该基因的原核表达质粒pBV-pvs。SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析表明:PVS-cp基因在大肠杆菌JM109中可特异地高效表达分子量约33kD的蛋白,且表达蛋白具有良好的抗原活性。利用该表达产物免疫动物家兔,获得的抗血清可用于大田马铃薯S病毒的快速检测。
关键词： 马铃薯 马铃薯S病毒 外壳蛋白基因 RT-PCR 序列分析 Western印迹 抗血清制备
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鸡传染性支气管炎山东A株病毒S_1高可变区基因的克隆
《中国预防兽医学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：参照国外已发表的M41高可变区S1序列设计一对引物 ,跨度为 1 .7kb左右。采用差速离心法浓缩病毒 ,提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增 ,得到与设计同样大小的PCRDNA片段 ,将PCR产物纯化 ,与质粒载体 (pGEM_TEasyVector)连接 ,并转入大肠杆菌JM1 0 9,获取阳性克隆。增菌培养后用小量碱提取法提取质粒 ,利用PCR扩增法与EcoRI酶切分析进行鉴定。对阳性质粒DNA进行测序 ,利用Omiga2 .0、Dnasis等分子生物学软件进行分析 ,并与标准M41株、T株等进行序列比较 ,结果表明 :山东传支A株与标准M41株同源性较高 ,最大同源率为 99% ;与标准T株同源性较差 ,最大同源率为 80 %。理论酶切图谱与M41相同 ,为同一基因型。
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