科研产出
1型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建
《家禽科学 》 2011
摘要：参考1型鸭肝炎病毒基因组序列,设计7条引物,用RT-PCR方法扩增出覆盖整个病毒基因组三个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆。测序结果表明,该克隆与母本毒序列同源性达99.6%,并且5'端的T7启动子和3'端的MluⅠ线性化位点均成功引入。
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石榴花二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因RT-PCR扩增体系的建立与优化
《山东林业科技 》 2011
摘要：分别以红花和粉花石榴‘泰山红’、‘重瓣粉花’盛花期花瓣为材料,提取RNA后进行反转录,对DFR基因的PCR扩增体系进行了优化,建立了高效、特异的石榴花DFR基因的RT-PCR扩增体系,为克隆基因全长奠定了基础。
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一株韩国新型DHV的分离及RT-PCR鉴定
《浙江农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：从山东省某疑似鸭肝炎发病区分离到1株病毒JFX08,血清中和试验结果表明该分离毒与传统的Ⅰ型鸭肝炎病毒无交叉保护,分离毒回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。根据已公布的韩国新型(基因C型)DHV的序列设计合成一对引物,进行RT-PCR扩增,得到大小约414 bp的目的条带;测序分析发现,分离毒与传统Ⅰ型DHV之间的相似性较低,而与韩国新型DHV之间的相似性高达93.2%~94.0%;进化分析结果表明,该分离毒与韩国新型DHV的遗传距离最近,属基因C型DHV。
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龙葵SorMT2a和SorMT2c基因的克隆及其转化烟草研究
《山东农业科学 》 2010
摘要：以龙葵为试验材料,利用RT-PCR技术分离到2个长度不同的编码Ⅱ类MT(金属硫蛋白)的cDNA克隆SorMT2a(EU760481)和SorMT2c(EU760483),成功构建植物表达载体pROKⅡ-SorMT2a和pROKⅡ-SorMT2c,通过农杆菌介导法转化烟草并通过PCR验证了基因的表达情况。与野生植株相比,转SorMT2a和SorMT2c基因烟草对镉的耐受性不同,有的转SorMT2a基因植株在MS培养基中的CdCl2浓度达到200μmol/L时仍然生长良好,生物量和株高均大于野生型植株;而转SorMT2c基因植株对镉的耐受性没有提高。这说明SorMT2a基因在植物对镉的耐受性中起作用,而SorMT2c基因则不起作用,从而也说明了同一类基因不同家族可能具有不同功能。
关键词： 龙葵 金属硫蛋白 重金属 RT-PCR SorMT2a SorMT2c
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山东省沙地葡萄茎痘相关病毒的检测
《果树学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为明确沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)在山东省发生的情况,2006-2007年在葡萄主栽区和葡萄品种资源圃进行了田间调查、样品采集和病原检测。应用GRSPaV外壳蛋白基因表达获得的多克隆抗体,经间接酶联免疫吸附试验(PTA-ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测,在2a采集的298个样品中,125个样品为阳性反应,阳性率41.95%。125个阳性样品涉及43个品种,品种被侵染率74.14%。研究对检测的样品用RT-PCR法验证,有3对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340bp片段、外壳蛋白(CP)基因842bp片段和RNA聚合酶(RdRp)基因499bp片段。
关键词： 葡萄茎痘相关病毒 病原检测 ELISA RT-PCR
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融合蛋白C3d提高新城疫灭活苗的免疫原性
《西南农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：补体C3d是补体系统(complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。本试验利用RT-PCR技术从AA肉鸡肝脏总RNA中扩增C3d cDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3),1%IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blotting证实目的蛋白为C3d。亲和层析分离C3d融合蛋白,与纯化新城疫病毒(Lasota株)经戊二醛连接后免疫SPF鸡。血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体水平,MTT法检测胸腺T淋巴细胞转化率。结果表明C3d融合蛋白能够提高特异性抗体水平以及细胞免疫水平,本研究为进一步研究、利用鸡补体C3d奠定了基础。
关键词： C3d RT-PCR 亲和层析 MTT 血凝抑制试验
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RT-PCR快速检测牛病毒性腹泻病毒方法的建立与应用
《中国兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：根据已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5'-UTR序列,设计1对特异性引物,建立了快速检测BVDV的RT-PCR方法。利用该方法能从BVDV中扩增出196bp特异性目的片段。应用此方法检测了26份疑似病例临床样品,14份为阳性。试验表明,该方法特异性强、敏感性好,能检测到1pg的病毒RNA,是一种快速准确的检测方法。
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山东地区猪流感的流行病学调查与分析
《畜牧与兽医 》 2008 北大核心
摘要：猪是禽流感病毒"禽-猪-人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为流感的预防提供重要依据。血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染,本研究应用基因芯片诊断技术对2006年9月至2007年6月间来自山东各地发病猪群的922份样品进行了猪流感病毒的分型检测,结果显示猪流感病毒阳性89份,阳性率为9.65%,其中H1N1,H3N2和H9N2的阳性样品数分别为31、57、1。这为了解山东猪流感病毒的发生和分布,并采取相应的公共卫生措施提供了依据。
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