科研产出
以实时荧光定量PCR技术检测转基因玉米MON88017
《作物学报 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：根据转基因玉米MON88017的左侧侧翼序列和玉米内标基因(zSSIIb)分别设计特异性引物及Taqman探针,通过实时荧光PCR技术建立MON88017的定量特异性检测方法。利用含有内标基因和侧翼序列的标准质粒分子,建立了玉米内标基因和侧翼序列的标准曲线。检测了5个已知MON88017含量(0.01%、0.05%、0.10%、0.50%和1.00%)的混合样品中的转基因含量,结果表明检测底限可以达到19~30个阳性拷贝。该研究建立的实时荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强。
关键词： 转基因生物 实时荧光定量PCR MON88017 标准分子
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镉处理下不同富集镉花生营养器官AhMTⅡ mRNA表达变化
《中国农业科技导报 》 2011 CSCD
摘要：利用含镉(Cd2+)营养液培养花生幼苗,取不同营养器官用以检测AhMTⅡmRNA表达量的变化。构建了PMD18T-AhMTⅡ和PMD18T-actin重组质粒,用SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法精确分析了花生AhMTⅡmRNA表达水平。研究结果表明,花生幼苗期不同营养器官间AhMTⅡmRNA表达量差异显著(P<0.01):根>叶>茎,低富集镉花生品种XD1011根部AhMTⅡmRNA表达量显著低于高富集镉花生品种XA004。AhMTⅡmRNA表达与镉处理水平具有高度相关性,尤其是根部和叶部,在0~50μmol/L镉处理水平间,品种XD1011和品种XA004根部相关系数分别为0.977和0.96,品种XD1011叶部相关系数为0.91,而品种XA004在0~200μmol/L镉处理水平间相关系数为0.959。该结果可为筛选低富集镉花生品种提供理论与技术支持。
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一株韩国新型DHV的分离及RT-PCR鉴定
《浙江农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：从山东省某疑似鸭肝炎发病区分离到1株病毒JFX08,血清中和试验结果表明该分离毒与传统的Ⅰ型鸭肝炎病毒无交叉保护,分离毒回归3日龄雏鸭,可复制出鸭肝炎的典型症状和病理变化。根据已公布的韩国新型(基因C型)DHV的序列设计合成一对引物,进行RT-PCR扩增,得到大小约414 bp的目的条带;测序分析发现,分离毒与传统Ⅰ型DHV之间的相似性较低,而与韩国新型DHV之间的相似性高达93.2%~94.0%;进化分析结果表明,该分离毒与韩国新型DHV的遗传距离最近,属基因C型DHV。
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龙葵SorMT2a和SorMT2c基因的克隆及其转化烟草研究
《山东农业科学 》 2010
摘要：以龙葵为试验材料,利用RT-PCR技术分离到2个长度不同的编码Ⅱ类MT(金属硫蛋白)的cDNA克隆SorMT2a(EU760481)和SorMT2c(EU760483),成功构建植物表达载体pROKⅡ-SorMT2a和pROKⅡ-SorMT2c,通过农杆菌介导法转化烟草并通过PCR验证了基因的表达情况。与野生植株相比,转SorMT2a和SorMT2c基因烟草对镉的耐受性不同,有的转SorMT2a基因植株在MS培养基中的CdCl2浓度达到200μmol/L时仍然生长良好,生物量和株高均大于野生型植株;而转SorMT2c基因植株对镉的耐受性没有提高。这说明SorMT2a基因在植物对镉的耐受性中起作用,而SorMT2c基因则不起作用,从而也说明了同一类基因不同家族可能具有不同功能。
关键词： 龙葵 金属硫蛋白 重金属 RT-PCR SorMT2a SorMT2c
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猪背膘组织二脂酰甘油酰基转移酶基因(DGAT1和DGAT2)的发育性表达分析
《农业生物技术学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：酰基辅酶A:二脂酰甘油酰基转移酶(acyl-coA:diacylglycerol acyltransferase,DGAT)是催化甘油三酯合成最后一步反应的关键酶,包括DGAT1和DGAT2两种;阐明其在发育过程中的表达规律对于找到控制中外猪种脂肪沉积能力差异的基因十分必要。本研究分别用RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR的方法分别对莱芜猪和杜洛克3日龄仔猪和成年猪背膘组织中DGAT1和DGAT2 mRNA表达量进行了分析。结果表明,莱芜猪和杜洛克成年猪DGAT1 mRNA的表达量均高于3日龄仔猪,分别为5.0倍和2.7倍;成年猪DGAT2 mRNA表达量高于3日龄仔猪,分别为27.6倍(P<0.01)和4.8倍(P<0.05)。两品种成年猪和3日龄仔猪DGAT2基因表达量的变化均高于DGAT1。品种间同一发育时期比较,杜洛克3日龄仔猪背膘组织中DGAT2基因的表达量高于莱芜猪,但成年莱芜猪背膘组织中DGAT2基因的表达量高于杜洛克,差异均不显著(P>0.05)。提示DGAT2基因可能与中外猪品种脂肪沉积能力的差异有关。
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副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用
《家畜生态学报 》 2010
摘要：根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。
关键词： 副猪嗜血杆菌 infB基因 SYBR Green I 荧光定量PCR
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实时荧光定量PCR检测鸡传染性贫血病毒方法的建立
《中国动物检疫 》 2009
摘要：建立了Taqman实时荧光定量PCR方法检测鸡传染性贫血病毒(CAV)。选取CAV病毒的序列设计引物和探针。以梯度稀释的含有CAV目的扩增片段的质粒作为标准品,进行定量PCR反应以确定检测灵敏度。2.0×105～2.0×102个拷贝,4个数量级的范围内定量PCR有"S"型扩增曲线,检测灵敏度为200个拷贝。根据病毒拷贝数与定量反应Ct值的关系,绘制了标准曲线。该方法具有特异性,对传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病毒、禽白血病病毒和马立克病毒核酸都没有扩增反应。采用实时荧光定量PCR方法检测试验感染鸡的肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、法氏囊、泄殖腔棉拭子等样品,所有检测样品都有"S"型扩增曲线,且荧光信号值高。实时定量PCR检测CAV的方法,灵敏度高,特异性好,可以进行定量分析,在禽病的快速检测上具有重要意义。
关键词： 鸡传染性贫血 实时荧光定量PCR Taqman探针
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hsp70基因编码区一新SNP的发现及其多态性与热应激性状的相关性研究(英文)
《中国农业科技导报 》 2009
摘要：为了探索hsp70基因多态性与热应激性状(直肠温度和红细胞钾含量)的相关性,利用PCR-SSCP方法检测290头中国荷斯坦奶牛hsp70基因的未知SNP,并利用PCR-RFLP方法对基因进行分型,采用SBYE荧光定量PCR方法检测不同组织中hsp70mRNA表达水平。结果显示,在1524位点发现一个G/A突变,有两种基因型(AA/AB),基因频率和基因型频率分别是0.9570,0.0430和0.9137,0.0863,卡方检验该群体处于哈迪-温伯格平衡。相关性分析结果表明,AA、AB基因型的直肠温度没有显著差异,但在红细胞钾含量中有极显著差异。肝脏中hsp70mRNA表达水平显著高于其他组织。推测hsp70基因1524位点的G/A SNP与中国荷斯坦奶牛热应激有关。
关键词： 热休克蛋白70 多态性 热应激 荧光定量PCR 荷斯坦奶牛
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山东省沙地葡萄茎痘相关病毒的检测
《果树学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为明确沙地葡萄茎痘相关病毒(GRSPaV)在山东省发生的情况,2006-2007年在葡萄主栽区和葡萄品种资源圃进行了田间调查、样品采集和病原检测。应用GRSPaV外壳蛋白基因表达获得的多克隆抗体,经间接酶联免疫吸附试验(PTA-ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测,在2a采集的298个样品中,125个样品为阳性反应,阳性率41.95%。125个阳性样品涉及43个品种,品种被侵染率74.14%。研究对检测的样品用RT-PCR法验证,有3对引物均扩增出了预期片段,分别为解旋酶基因340bp片段、外壳蛋白(CP)基因842bp片段和RNA聚合酶(RdRp)基因499bp片段。
关键词： 葡萄茎痘相关病毒 病原检测 ELISA RT-PCR
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