科研产出
干旱胁迫对花生PnAG_1基因的表达及生理指标的影响
《中国农业科技导报 》 2012 CSCD
摘要：为了探讨NBS-LRR结构域中抗性相关基因PnAG1与干旱胁迫的相关性,比较花生在不同干旱程度胁迫下主要防御酶活性变化情况以及PnAG1基因表达量变化动态。经干旱胁迫后测定不同时期两花生品种叶片的过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性、丙二醛(MDA)含量和PnAG1基因表达量的动态变化。结果表明,在干旱胁迫后两品种的POD、GR、MDA变化均表现出先下降后上升的趋势,SOD活性则为表现为持续上升,而PnAG1基因的表达量变化同样也呈现出先下降后上升的趋势,与防御酶活性变化相似,因此推断PnAG1基因在抗病基础之上可能同植物防御体系存在相关。
关键词： 花生 荧光定量PCR 酶活测定 NBS-LRR 干旱胁迫
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SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒定量分析中的应用
《植物保护学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：为了探讨SYBR Green Ⅰ实时定量RT-PCR技术在甜樱桃病毒粒子定量分析中的应用前景,以复合感染李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf vi-rus,PDV)、樱桃病毒A(Cherry virus A,CVA)、樱桃小果病毒-2(Little cherry virus-2,LChV-2)的甜樱桃"红灯"Prunus avium cv.Red Lamp植株为研究对象,采用相对定量方法,分析各病毒的外壳蛋白基因的表达,用以指示病毒的增殖量。在花、幼叶、功能叶、衰老叶中均能检测到4个基因,但各基因表达量在各器官中存在差异。PNRSV-CP与CVA-CP表达模式相似,功能叶中明显高于其它器官,衰老叶中急剧降低。PDV-CP与LChV2-CP表达模式类似,幼叶中的表达量较高,功能叶片中较低。PNRSV-CP在花、功能叶中的表达显著高于其它3个病毒基因。LChV2-CP在各器官中的表达量均低于其余3个基因。该方法适用于植物组织内多种甜樱桃病毒增殖量的分析。
关键词： 李属坏死环斑病毒 李矮缩病毒 樱桃病毒A 樱桃小果病毒-2 实时定量RT-PCR
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山东水稻黑条矮缩病毒dsRNA提取与RT-PCR检测研究
《山东农业科学 》 2012
摘要：水稻黑条矮缩病是由灰飞虱和白背飞虱等传播的病毒性病害,给水稻生产带来严重危害。通过提取水稻黑条矮缩病毒dsRNA发现,感病植株的dsRNA凝胶电泳存在8条带,而健康植株是空白结果,与报道的玉米粗缩病毒结果相同。根据水稻黑条矮缩病毒基因组序列的信息,在其S1和S10片段分别设计合成两对引物,对感染病毒植株和健康植株进行扩增,可在感病植株中分别扩增出水稻黑条矮缩病毒基因组特有的条带,而在健康植株中未能扩增出条带。利用此种方法可以建立水稻黑条矮缩病检测体系,对水稻黑条矮缩病进行早期检测和预报。
关键词： 水稻黑条矮缩病 dsRNA 病毒检测 RT-PCR
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转基因大豆BPS-CV127-9 PCR定量检测研究
《大豆科学 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：采用SYBR Green实时荧光定量PCR技术,建立转基因大豆BPS-CV127-9的定量检测方法.通过设计特异引物,扩增内标准基因lectin和BPS-CV127-9的5'侧翼序列,建立2种基因的拷贝数-CT标准曲线,根据标准曲线方程计算样品中的转基因含量,并且通过熔解曲线分析扩增反应特异性.结果表明,lectin基因和侧翼序列标准曲线线性关系良好,R2值分别为0.999和0.998,变异系数(CV) 1.50%~18.51%、标准偏差(SD)0.02 ~0.07.检测4个已知BPS-CV127-9含量(1%、0.5%、0.1%、0.05%)的转基因混合样品,实测值与实际值接近.该检测方法具有快速、灵敏、准确、特异、高通量等优点,可以作为转基因大豆BPS-CV127-9的定量检测方法.
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猪圆环病毒2型特异性荧光定量PCR检测方法的建立与应用
《家畜生态学报 》 2011
摘要：研究旨在建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测PCV 2的技术方法。根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV 2)的基因序列(HQ148879),设计一对特异性引物,利用普通PCR技术扩增出PCV 2的ORF2基因702bp片段,并克隆到pVAX1载体,以纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为阳性标准品,摸索荧光定量PCR试验,并绘制标准曲线,以此建立一种荧光定量PCR特异性检测猪圆环病毒的方法。结果表明,该方法对PCV 2有很好的特异性,其敏感性比常规PCR高100倍,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。经临床应用表明荧光定量PCR方法的建立实现了对PCV 2特异性的快速诊断和定量检测。
关键词： 猪圆环病毒2型 SYBR Green I 荧光定量PCR 特异性
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1型鸭肝炎病毒基因组全长cDNA克隆的构建
《家禽科学 》 2011
摘要：参考1型鸭肝炎病毒基因组序列,设计7条引物,用RT-PCR方法扩增出覆盖整个病毒基因组三个忠实性片段,并按顺序组装进载体pBR322中,获得全长cDNA克隆。测序结果表明,该克隆与母本毒序列同源性达99.6%,并且5'端的T7启动子和3'端的MluⅠ线性化位点均成功引入。
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石榴花二氢黄酮醇还原酶(DFR)基因RT-PCR扩增体系的建立与优化
《山东林业科技 》 2011
摘要：分别以红花和粉花石榴‘泰山红’、‘重瓣粉花’盛花期花瓣为材料,提取RNA后进行反转录,对DFR基因的PCR扩增体系进行了优化,建立了高效、特异的石榴花DFR基因的RT-PCR扩增体系,为克隆基因全长奠定了基础。
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