科研产出
鸡β-防御素-1基因在大肠杆菌中的融合表达及其初步纯化与抗菌活性测定
《家禽科学 》 2013
摘要：防御素是广泛存在于动、植物体内的一大类阳离子抗菌肽,它们在宿主—家禽天然免疫中发挥着重要作用,是机体抵御外界病原微生物入侵的一道重要防线,在鸡体内只存在Gallinacins类β-防御素。鸡β-防御素-1(Gal-1)对多种致病菌都具有杀菌作用,具有很好的药用开发前景。通过PCR技术从重组质粒pMD-Gal1中克隆出Gal-1基因成熟肽编码区,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组质粒pET30a-Gal1,将该质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)菌株。筛选阳性克隆菌株,用浓度为1.0mmol/L的IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析表明,Gal-1基因在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物表观分子量约为12kDa。对融合蛋白表达条件进行优化,提高可溶组分所占比例。表达上清用Ni2+-NTA Sepharose 4B进行亲和层析纯化,在洗脱液中显示单一条带。琼脂糖孔穴扩散法检测显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有明显的抑制活性。Gal-1融合蛋白成功表达为进一步研究鸡β-防御素的功能奠定基础。
关键词： 抗菌肽 β-防御素-1(Gal-1) 融合表达 分离纯化 亲和层析 抑菌活性
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DEAE-Sepharose-FF离子交换层析对牛背最长肌中钙激活酶的纯化研究
《农产品加工(创新版) 》 2009
摘要：通过DEAE-Sepharose-FF离子交换层析法,对牛背最长肌中钙激活酶(calpain)进行了分离纯化,并确定了最佳分离条件。试验分2个阶段进行离子交换线性梯度洗脱,第1阶段线性梯度为浓度0～215mmol/LNaCl,第2阶段线性梯度为浓度215～500mmol/LNaCl,洗脱流速为2mL/min,并对每一纯化步骤蛋白浓度的变化情况作出了详细的描述和说明;在波长280nm下测定洗脱液的光吸收值,洗脱得到3个蛋白峰,μ-calpain和m-calpain分别在NaCl浓度为130～200mmol/L和230～330mmol/L时被洗脱下来,钙激活酶蛋白抑制剂(calpastatin)在NaCl浓度为25～125mmol/L时被洗脱下来。calpain的分子量约为110kDa,通过对提取液电泳试验表明,检测结果恰好在分子量约为110kDa处有一条清晰的带,说明所得提取物为calpain。
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鸡α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其抗病毒活性测定
《山东农业科学 》 2006
摘要：本试验将已构建的鸡α-干扰素重组酵母表达质粒pPIC-ChIFNα克隆至Pichia pastorisGS115基因组中,从阳性转化子中筛选出2株能高效表达鸡α-干扰素的重组酵母菌株,并对表达产物进行了纯化和抗病毒活性的测定。结果表明,Pichia pastoris表达的重组ChIFNα具有较高的抗病毒活性,其活性单位为570×104U/ml,结合蛋白定量计算其比活性为2 980×104U/mg。
关键词： 鸡α-干扰素成熟蛋白 Pichiapastoris 基因表达 分离纯化 抗病毒活性
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