科研产出
牛A组轮状病毒VP4全基因的克隆与原核表达
《贵州农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：以G6型牛轮状病毒总RNA为模板,应用RT-PCR技术扩增牛轮状病毒VP4开放性阅读框,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pEASY-T3载体中,成功构建出克隆质粒pEASY-T3-VP4。经双酶切后再将该基因重组于原核表达载体pET32a(+)中,构建出原核表达质粒pET32a-VP4。将pET32a-VP4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约108 KD的融合蛋白带,成功构建了能够稳定表达VP4蛋白的基因工程菌株,为进一步研制牛轮状病毒基因工程疫苗奠定了基础。
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小球藻Δ12脂肪酸去饱和酶基因的克隆与序列分析
《海洋科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用已报道的Δ12脂肪酸去饱和酶基因序列的保守区域,设计简并引物,通过RT-PCR的方法获得了小球藻NJ-7的内质网型Δ12脂肪酸去饱和酶基因(CvFAD2)的部分序列,然后采用RACE的方法分别克隆到5′片段和3′片段,拼接后设计特异引物扩增到全长cDNA。该基因全长为2 032 bp,ORF为1 158 bp,编码385个氨基酸,分子质量约为44 ku。根据已经得到的CvFAD2序列推导成氨基酸序列与一些已知物种的FAD2氨基酸序列相比较,同源性分别为普通小球藻(Chlorella vulgaris)75%,莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)57%,石榴(Punica granatum)57%,麻疯树(Jatropha curcas)52%。系统发育分析表明,南极小球藻CvFAD2基因与真核微藻(衣藻和普通小球藻)的FAD2基因聚在一起,介于真菌与高等植物之间,并且真核微藻FAD2基因与高等植物的同源性更高,推测其在进化上与高等植物的亲源关系更近。
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花生野生近缘种生物素羧基载体蛋白基因的克隆与结构分析
《华北农学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：根据栽培花生鲁花14生物素羧基载体蛋白基因accB1和accB2cDNA序列设计基因特异引物,克隆了花生野生近缘种Arachis duranensis、A.rigonii、A.batizocoi和A.hoehnei的accB1和accB2cDNA序列。序列分析表明,accB1和accB2在栽培花生和野生近缘种中高度保守,氨基酸序列一致性分别高于98.6%和97.5%。A基因组A.duranensis、A.rigonii和B基因组A.batizocoi、A.hoehnei的accB1和accB2的氨基酸序列存在差异,但与基因组来源无关。花生野生近缘种A.duranensis、A.rigonii、A.batizocoi和A.hoehnei accB2基因组序列分析表明,栽培花生和野生近缘种的accB2的基因结构相同。A基因组的A.duranensis与B基因组的A.batizocoi和A.hoehnei的accB2基因组DNA核苷酸序列一致性分别为98.9%,98.8%,而A基因组的A.rigonii与A.duranensis、A.batizocoi和A.hoehnei的序列一致性分别为93.5%,93.6%,93.4%。研究表明,生物素羧基载体蛋白基因在栽培花生及野生近缘种中非常保守。
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碱蓬PEPCase基因的克隆与分析
《海洋科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次获得碱蓬(Suaeda glauca)中含PEPCase基因完整编码区的cDNA序列,长度为3 038 bp。获得的序列采用生物信息学方法和系统进化方法进行分析。结果表明,获得的cDNA序列包含2 898 bp的完整开放阅读框,编码的966个氨基酸序列含有两个PEPCase活性位点以及6种其他的活性位点;预测蛋白质的相对分子质量为109 785.3,等电点为5.51,属于不稳定的亲水性蛋白;含量相对较多的氨基酸是Leu、Glu、Arg、Asp、Ser,不含Pyl和Sec;不包含跨膜结构和信号肽序列,推断为非分泌性蛋白;二级结构以α螺旋为主,三级结构为紧密球状结构;分析结果还表明获得的碱蓬PEPCase基因应该属于C3型。通过对碱蓬PEPCase基因的克隆及序列分析从而为后期碱蓬PEPCase蛋白表达的研究及获得高油量的转基因碱蓬植株奠定了基础。
关键词： 碱蓬(Suaeda glauca) 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因(PEPCase基因) RACE 基因克隆 序列分析
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水稻CO39几丁质酶基因的克隆
《热带作物学报 》 2008 CSCD
摘要：以CO39四叶期水稻苗的叶片为材料,提取水稻基因组DNA,通过PCR扩增获得水稻几丁质酶基因OsRCchi1,经序列测定得知该基因大小为1065bp,序列比对结果显示,OsRCchi1与已知的水稻几丁质酶基因Oryza sativa(japonica cultivar-group)classⅢchitinase RCB4(Rcb4)mRNA(AF350426)、Oryza sativa chitinase mRNA(AF330230)及Oryza sativa subsp.japonicaclassⅢchitinase(chib1)gene(AF296279)的相似性分别为85.9%、76.2%和75.0%。因此,可以认为OsRCchi1基因是classⅢ几丁质酶基因家族的一个成员。
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甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建
《果树学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质。从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合,重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5’(2859bp)和3’(852bp)。应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3692bp,该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97%￣99%的同源性,登录号DQ364058。应用BamHⅠ、KpnⅠ、BglⅡ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SPS,该载体含有Npt-II选择标记基因。
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梨α-法尼烯合成酶基因的克隆及其序列分析
《生物技术通报 》 2007 CSCD
摘要：利用RT-PCR技术从鸭梨的果皮中获得了一个全长为1824bp的α-法尼烯合成酶基因(α-Farnesene Synthase,PFS)克隆,该cDNA包含一个由1728个核苷酸组成的开放阅读框架,编码分子量约66kDa的576个氨基酸残基的蛋白质。序列相似性分析结果表明,它与苹果中克隆到的AFS1基因具有很高的同源性,核苷酸序列一致性为97.34%,且具有典型的萜类合成酶基因保守结构域。与来源于黄瓜、杉树、松树的α-法尼烯合成酶基因的同源性较低。
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花生(Arachis hypogaea L.) CaM基因克隆与序列分析
《花生学报 》 2007
摘要：提取花生(Arachis hypogaea L.)幼嫩叶片基因组DNA,合成5'端和3'端引物,进行PCR并克隆测序,得到CaM基因组的2个异型基因PGCaM-1和PGCaM-3,登录Genebank并注册为AY517933、AY572856。序列分析表明,PGCaM-1序列全长1425 bp,在第25个氨基酸之后有一个长度为973 bp的内含子,PGCaM-3序列全长447 bp。两个异型基因的开放读码框均由447个核苷酸组成,共编码148个氨基酸,同属于EF手型CaM超家族成员,核苷酸和氨基酸序列的同源性分别为96%和98%,与已知花生CaM cDNA序列及氨基酸均有极高的同源性,序列之间的差异可能引起表达和功能上的差异。
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