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甜瓜蔗糖磷酸合成酶基因全克隆及工程载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 侯丽霞 1 ; 何启伟 1 ; 赵双宜 2 ; 焦自高 1 ; 王崇启 1 ; 董玉梅 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院蔬菜研究所

2.山东大学生命科学院

关键词： 甜瓜;蔗糖磷酸合成酶;基因克隆;工程载体

期刊名称： 果树学报

ISSN： 1009-9980

年卷期： 2008 年 25 卷 04 期

页码： 104-107

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 蔗糖磷酸合成酶在甜瓜果实蔗糖合成途径中起关键性的调节作用,克隆该基因并导入甜瓜低糖自交系,可改良甜瓜果实品质创新优良种质。从甜瓜幼苗叶片提取总RNA,利用RT-PCR与Southern blot方法相结合,重组子质粒经限制性内切酶酶切和PCR验证以及测序同源性比较,克隆到基因的5’(2859bp)和3’(852bp)。应用高保真Taq聚合酶PCR拼接蔗糖磷酸合成酶完整cDNA序列3692bp,该片段与GenBank中其它植物基因序列具有97%￣99%的同源性,登录号DQ364058。应用BamHⅠ、KpnⅠ、BglⅡ限制性酶切获得植物双元表达载体pROK2及基因的线性片段,通过T4连接酶反应,构建了以CaMV35S为启动子,以Tnos为终止子的工程载体pROK-SPS,该载体含有Npt-II选择标记基因。

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