科研产出
花生NAC类新基因AhNAC1的克隆及序列分析
《西北植物学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：NAC转录因子是近些年来新发现的植物特有的转录调控因子,其N端含有高度保守的NAC结构域,在植物的生长发育、器官建成、逆境胁迫以及作物的品质改良中具有重要作用。通过构建优质出口型大花生‘鲁花14’开花后20~60d不同发育时期的种子混合cDNA文库,克隆到一个花生NAC类基因AhNAC1(GenBank登录号为EU669863)。序列分析表明,AhNAC1基因的cDNA序列长度为1453bp,其开放阅读框长度为912bp,编码303个氨基酸,预测其分子量为34.1kD,等电点为7.6。通过与其它植物的NAC转录因子的蛋白序列比对,发现AhNAC1蛋白属于ATAF亚族,可能在植物种子发育及逆境反应中起作用。此花生NAC类基因属首次报道。
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冬枣两个ACC氧化酶基因的cDNA克隆及其表达模式
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：根据植物ACC氧化酶(ACO)家族的氨基酸和核苷酸保守区序列设计简并引物,采用3′RACE技术从半红期冬枣果实中分离了两个ACO同源基因片段,随后通过PCR技术进一步获得了两个包含完整开放阅读框(ORF)及3′端非编码区(UTR)序列的ACO基因的cDNA,即ZjACO1和ZjACO2。两个基因序列在GenBank中的登录号为EU216549和EU216550,其大小分别为1115bp和1105bp,编码蛋白大小分别为319个和321个氨基酸。ZjACO1和ZjACO2在核苷酸和氨基酸水平上的同源性分别为79.4%和84.0%。Northern杂交结果表明,这两个基因在冬枣叶片中不表达,在果实不同发育阶段中的表达具有明显差异。
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甘薯二羟基黄酮醇还原酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达
《分子植物育种 》 2008 CSCD
摘要：根据其它作物的二羟基黄酮醇还原酶(DFR)基因的保守序列设计引物,利用RT-PCR方法从甘薯块根中分离出花青素合成相关基因DFR基因,并定名为ibDFR。该基因全长1232bp,编码398aa。核甘酸序列分析表明,与牵牛相似系数达85%,与烟草的相似系数达到67%,与马铃薯的相似系数达75%。将ibDFR连接到pET30a(+)载体中,检测ibDFR在大肠杆菌中的表达。实验结果表明ibDFR蛋白质分子量大小与推算一致,能在大肠杆菌中转录表达。
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两株高致病性PRRSV ORF6和ORF7基因克隆及序列分析
《中国畜牧兽医 》 2008 北大核心
摘要：应用RT-PCR方法从实验室分离的两株高致病性PRRSV SX、ZQ株中扩增出ORF6和ORF7,将其分别克隆、测序。用DNAStar软件分析所测序列,并与VR-2332株、LV株、周边国家及国内分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较,并绘制系统进化树,结果ORF6、ORF7核苷酸与北美洲型的同源性为91.1%~100%,与欧洲型的同源性为66.2%~70.7%,推导氨基酸与北美洲型的同源性为91.2%~100%,与欧洲型的同源性为62.3%~82.3%。证明新分离到的PRRSV SX株、ZQ株仍属北美洲型。SX株ORF6、ORF7核苷酸与国内新分离到的高致病性PRRSV JXA1株同源性分别为99.8%、100%;ZQ株ORF6、ORF7核苷酸与国内新分离到的高致病性PRRSV JXA1株同源性分别为99.6%、99.7%。
关键词： 高致病性PRRSV ORF6 ORF7 克隆 序列分析
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鹅细小病毒QY分离株NS2基因的克隆及序列分析
《家禽科学 》 2007
摘要：参照GenBank中收录的鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计并合成了扩增广东清远分离株(QY株)NS2基因的一对引物,利用PCR技术扩增出来长约1.5kb的目的片断,将其克隆到PMD18-T载体上,筛选重组质粒并进行了序列测定及分析,测序结果表明,GPV分离株NS2基因由1356个核苷酸组成,编码451个氨基酸。经与B株、DN株、FS株进行同源性比较,核苷酸的同源性分别为99.1%、99%和99%;推导的氨基酸同源性分别为98.7%、98.7%和987%。
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甜瓜果实蔗糖磷酸合成酶基因cDNA片段的克隆及表达分析
《园艺学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：根据在GenBank中登录的番茄、马铃薯等蔗糖磷酸合成酶基因的保守序列设计引物,采用RT-PCR方法从甜瓜花后25d的果实总RNA中扩增出目标cDNA片段,克隆到pMD18-T载体中。序列分析表明,该片段与番茄蔗糖磷酸合成酶氨基酸序列同源性为98.9%,GenBank中登记号为DQ355797。通过Northernblot检测其在甜瓜果实不同发育时期的表达变化,结果表明该基因在甜瓜果实花后25d开始表达,随着果实的成熟,表达量升高。
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鲁西黄牛α干扰素基因的克隆及表达
《动物学杂志 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：提取黄牛血液基因组DNA,PCR扩增α干扰素基因,重组到pET32a+表达载体中。测序结果表明,扩增片段含有498bp的ORF,可编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。构建原核表达载体pET32a+/BoIFN-α,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为40ku,表达量占菌体总蛋白的26.7%。结果从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,构建原核表达质粒,并实现了高效表达,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
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