科研产出
荷斯坦奶牛中性粒细胞β-防御素cDNA的克隆与序列分析
《动物学杂志 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎。根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物。收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA。经RT-PCR扩增牛β-防御素cDNA片段,回收纯化PCR产物,连接pMD18-T载体,转化感受态细胞JM109。在含X-Gal、Amp及IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR及双酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段碱基数为189bp,含有一个完整的ORF,能编码63个氨基酸的多肽,多肽中含6个保守半胱氨酸残基。用Blast程序进行检索比较,表明扩增序列与GenBank中发表的BNBD-7编码区序列96.3%相同。结果成功克隆出奶牛β-防御素家族的成员BNBD-7基因,为重组牛β-防御素的开发奠定了基础。
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鲁西黄牛α干扰素成熟蛋白基因的克隆及序列分析
《动物医学进展 》 2007
摘要：根据GenBank上发表的牛α干扰素基因序列,设计了一对特异性引物。提取黄牛血液中白细胞基因组DNA,PCR扩增出α干扰素基因,并与pMD18-T克隆载体相连。测序结果表明,扩增片段含有498个核苷酸,编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型最相近,氨基酸序列同源性为97.6%。获得BoIFNα-成熟蛋白基因,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
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二化螟酯酶基因克隆及序列分析
《江西农业学报 》 2006
摘要：根据已报道其它种类昆虫的酯酶基因设计1对兼并引物,首次从二化螟cDNA中克隆到5个酯酶基因片断,分别命名为:CS_est1、CS_est2、CS_est3、CS_est4、CS_est5,进一步在基因3′端设计接头引物得到CS_est1、CS_est2、CS_est3、CS_est5的3′端全序列。序列分析结果表明,这几个酯酶氨基酸序列具备酯酶家族的特征性氨基酸,与其它昆虫的酯酶同源性较高,为二化螟酯酶基因。其中包括形成催化三联体的3个氨基酸残基Ser、G lu、H is;酶的核心轴为FGESAG。各基因在Genebank上的登录号分别为:DQ401086、DQ401087、DQ401088、DQ401089、DQ401090。
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传染性喉气管炎病毒烟台株gE基因的克隆与序列分析
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)gE基因序列设计并合成1对引物,以烟台株为模板,用PCR法扩增出1条1.5kb的基因片段,并将其克隆至pMD18-T载体中。经电泳分析、酶切鉴定,将得到的重组质粒命名为pMD-gE并进行序列测定。将测序结果与ILTV美国标准攻毒毒株和中国王岗株,BHV-1,EHV-1,FHV-1,HHV-2,HHV-3,HVT,MDV-1,MDV-2,PRV的gE基因比较,发现核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.7%~11.9%和99.4%~15%。结果表明,不同ILTV毒株之间gE基因还是比较保守的,但不同疱疹病毒之间,gE基因的同源性较低。
关键词： 传染性喉气管炎病毒 烟台株 gE基因 克隆 序列分析
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花生(Arachis hypogaea L.)CaM cDNA基因的克隆
《中国油料作物学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：提取花生幼嫩叶片总RNA,以逆转录cDNA第一链为模板,合成5'端和3'端引物,PCR扩增并克隆得到花生钙调蛋白基因的2个异型基因。序列分析表明,PCaM-1和PCaM-2均由447个核苷酸组成,共编码148个氨基酸。2个cDNA的核苷酸序列同源性为84%,编码区的氨基酸序列同源性为96%,仅有5处替换:F-L、T-A、M-T、M-T和L-F。
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花生区组间杂种未成熟籽仁cDNA PCR库的构建与初步筛选
《花生学报 》 2003
摘要：从不亲和野生花生Arachisglabrata Benth与栽培种种间杂种中提取mRNA,反转录成cDNA双链并连接上接头,用接头上的引物进行PCR高保真扩增,成功建立了花生cDNA PCR库。用光敏生物素标记的探针与链亲和素包被的磁珠进行杂交筛库,与探针杂交的片段经洗脱、高保真扩增并加A后与T载体连接,转化受体菌XL1-Blue,获得白色阳性克隆菌落。用PCR快速鉴定的方法进行阳性菌落筛选,得到目的阳性克隆后测序,将可得到cDNA全编码区序列。本研究为改良花生品质与抗性奠定了基础。
关键词： 花生 ω-6油酸去饱和酶(DES)基因 花生白藜芦醇合酶(RS)基因 克隆 cDNAPCR库构建 筛选
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BT型细胞质雄性不育水稻及其三系的线粒体DNA研究
《西北植物学报 》 2001 CSCD
摘要：用 RAPD技术对 BT型水稻胞质雄性不育系秀 A及其保持系秀 B、恢复系湘晴以及杂种 F1代的线粒体 DNA进行了比较分析。结果表明不育系与其保持系间存在显著差异 ;不育系与其 F1之间 mt DNA也存在差异。在引物 OPJ- 0 8的扩增产物中 ,秀 A扩增出一条分子量为 80 0 bp的多态性片段 ;在引物 OPK- 1 0的扩增产物中 ,杂种 F1扩增出一条分子量为 90 0bp的片段。把这两片段回收、克隆并制备探针 ,OPJ- 0 880 0 的 Southern杂交结果显示不育系与其 F1杂交图谱存在多态性 ;OPK- 1 0 90 0 的 Southern杂交结果显示不育系与其保持系间存在差异。推测这两片段与育性可能有一定的联系
关键词： 水稻 细胞质雄性不育 线粒体DNA RAPD 克隆
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牛生长激素释放因子类似物基因的克隆与表达
《畜牧兽医学报 》 2000 北大核心
摘要：本研究以近期报道的高生物学活性、高代谢稳定性的牛生长激素释放因子类似物 (Ile2 ,Ala15,Leu2 7)bGRF(1- 2 9) -NH2 的氨基酸序列为模板 ,选用大肠杆菌高效表达所偏爱的密码子设计出该基因的全序列。采用化学合成法合成两个 3′末端有 19碱基互补的 80碱基的寡核苷酸片段。并互为模板和引物 ,通过酶促延伸合成完整的bGRF类似物基因 ,克隆于 pT7BlueT Vector中 ,通过蓝 /白筛选和酶切分析确定了阳性克隆。然后将目的基因从 pT7BlueT Vector克隆于pUC18载体中 ,以便多拷贝基因的制备。通过测序证明我们获得了目的克隆。将目的基因首尾串联 ,制备得到的 16拷贝基因在温控启动子PRPL 调控下于大肠杆菌中获得表达
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