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荷斯坦奶牛中性粒细胞β-防御素cDNA的克隆与序列分析

文献类型： 中文期刊

作者： 刘双龙 1 ; 王长法 1 ; 杨宏军 1 ; 杨少华 1 ; 阿合买提·买买提 2 ; 高运东 1 ; 仲跻峰 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院奶牛研究中心

2.新疆农业大学动物医学学院

关键词： β-防御素;克隆;牛

期刊名称： 动物学杂志

ISSN： 0250-3263

年卷期： 2007 年 42 卷 05 期

页码： 101-105

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研发牛β-防御素生物制剂,防治奶牛乳腺炎。根据已发表的牛β-防御素基因序列设计一对引物。收集患乳腺炎奶牛乳静脉血液中性粒细胞,用试剂盒提取总RNA。经RT-PCR扩增牛β-防御素cDNA片段,回收纯化PCR产物,连接pMD18-T载体,转化感受态细胞JM109。在含X-Gal、Amp及IPTG的LB平板上筛选阳性克隆,经菌落PCR及双酶切鉴定后,对目的片段进行测序。结果表明RT-PCR扩增出的cDNA片段碱基数为189bp,含有一个完整的ORF,能编码63个氨基酸的多肽,多肽中含6个保守半胱氨酸残基。用Blast程序进行检索比较,表明扩增序列与GenBank中发表的BNBD-7编码区序列96.3%相同。结果成功克隆出奶牛β-防御素家族的成员BNBD-7基因,为重组牛β-防御素的开发奠定了基础。

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