科研产出
花生中两个硬脂酰-ACP去饱和酶基因的克隆与序列分析
《花生学报 》 2013
摘要：脂肪酸去饱和酶是不饱和脂肪酸合成途径的关键酶,催化脂肪酸链特定位置上脱氢形成双键。本研究通过构建花生种子全长cDNA文库,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了两个FAB2基因,分别命名为AhFAB2-2和AhFAB2-3。其中AhFAB2-2全长为1387bp,ORF为1158bp,理论分子量为43.7kD,理论等电点为5.69;AhFAB2-3全长为1452bp,ORF为1188bp,理论分子量为44.9kD,理论等电点为6.37。它们推导的氨基酸序列与拟南芥的相似性依次为60.8%和57.2%;与大豆的相似性分别是62.3%和59.3%。这两个基因在GenBank上的登录号分别为KF358459和KF358460。
关键词： 硬脂酰-ACP去饱和酶基因 花生 基因克隆 序列分析
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苹果NAD–苹果酸酶基因的克隆及在不同组织和果实发育阶段的表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：NAD-malic enzyme(NAD-ME)是植物调控苹果酸代谢中的关键酶。以富士苹果(Malus×domestica Borkh.)叶片为试材,通过同源比对和RT-PCR技术,克隆获得2个NAD–苹果酸酶基因(MdNAD-ME1和MdNAD-ME2)。其ORF分别为1 785 bp和1 818 bp,推测其分别编码595和605个氨基酸的多肽。氨基酸序列和结构分析显示,含有5个保守的氨基酸区域(Ⅰ~Ⅴ),包含2个功能结构域:malic和NAD_bind_1_malic_enz。进化树分析结果显示,MdNAD-ME1属于α组双子叶亚组,MdNAD-ME2属于β组双子叶亚组。荧光实时定量结果显示,MdNAD-ME在被检测的组织中呈组成型表达,且在多种组织中MdNAD-ME1表达量高于MdNAD-ME2。在富士苹果果实不同发育阶段,MdNAD-ME1与MdNAD-ME2具有不同的表达模式。以上结果表明,克隆得到的MdNAD-ME1和MdNAD-ME2属于植物NAD-ME,在苹果的生长和发育过程中MdNAD-ME1和MdNAD-ME2可能起到不同作用。
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花生蛋白激酶基因AhSTK的克隆与序列分析
《山东农业科学 》 2013
摘要：从优质花生鲁花14的cDNA文库中发现一条序列,全长为1 399 bp,3'端含有polyA尾,通过blastx搜索得知其为蛋白激酶基因,命名为AhSTK。以该花生cDNA序列为模板设计引物,克隆得到花生Ah-STK基因。序列分析表明,AhSTK基因的开放阅读框长度为1 080 bp,编码359个氨基酸,预测其分子量为38.9 kD,等电点为6.42,编码的蛋白质无信号肽,无跨膜结构,预测定位于细胞质。与其他植物中蛋白激酶的氨基酸序列比对发现,与大豆GmSTK蛋白同源性最高。器官特异性分析发现,该基因在花生根中表达量较高,而在花中表达量较低。花生AhSTK基因的克隆为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。
关键词： 花生 蛋白激酶 AhSTK蛋白 序列分析 器官特异性表达
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1株产蛋高峰鸡H9N2的分离鉴定及HA基因序列分析
《西南农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：从产蛋率下降的蛋鸡群中分离到1株具有血凝性的病毒,经HI交叉抑制试验证实为H9N2病毒,命名为A/Chicken/Shandong/JN/11,病毒对SPF鸡基本无致病性,IVPI为0。对其HA基因进行克隆测序,HA基因裂解位点的序列为RSSR↓GL,与弱毒基序一致;有7个潜在糖基化位点;受体结合位点除198位有变异外,其余均较保守;A/Chicken/Shandong/JN/11分离株分GenBank上发表的近几年来山东参考株HA基因的核苷酸之间的同源性为89.9%~97.4%,氨基酸序列之间的同源性为93.4%~97.5%。系统进化树分析表明,该毒株与近年来国内流行的A/Chicken/zhejiang/ZLB/11禽流感毒株类似。
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花生甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆与序列分析
《花生学报 》 2013
摘要：甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的功能及作用机理在模式植物拟南芥中已经得到了较为充分的研究,但是在花生中还没有关于这类基因的报道,其功能也没有得到证实。本研究通过Bioedit软件在花生cDNA文库中找到了6个可能编码GPAT蛋白的基因片段,其中有3个基因没有包含完整的开放阅读框。我们通过5'-和3'-RACE RT-PCR对这3个基因的全长进行了克隆,得到了包含完整读码框的基因序列,并将序列在GenBank上注册,同时对得到的序列进行了初步分析。
关键词： 甘油-3-磷酸酰基转移酶基因 花生 基因克隆 序列分析
三个花生溶血磷脂酸酰基转移酶基因的克隆与序列分析
《花生学报 》 2013
摘要：溶血磷脂酸酰基转移酶在植物油脂合成途径中具有重要的作用。本研究通过构建花生种子全长cDNA文库,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了三个LPAT基因,分别命名为AhLPAT2,AhLPAT4和AhLPAT5。其中AhLPAT2全长为1626bp,ORF为1164bp,理论分子量为43.2kD,理论等电点为9.42;AhLPAT4全长为1618bp,ORF为1152bp,理论分子量为43.9kD,理论等电点为9.23;AhLPAT5全长为1911bp,ORF为1137bp,理论分子量为43.7kD,理论等电点为8.99。它们推导的氨基酸序列与拟南芥的同源性依次为78%,65%和65%;与大豆的同源性分别是82%,80%和82%。将这三个基因在GenBank上注册,注册号分别为JN032677,KC160499,KC160500。
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鸡新城疫病毒河北分离株F基因的分子特性分析
《中国兽医学报 》 2012 北大核心 CSCD
摘要：通过毒力测定、RT-PCR及F基因的序列测定与遗传进化分析,对2005-2008年从河北省部分地区的发病鸡群中分离到的10株新城疫病毒(NDV)进行了研究。各分离株经典毒力测定结果显示:MDT在37.6～54.4h之间,ICPI在1.71～2.0之间,IVPI值在2.16～2.8之间,均为新城疫病毒强毒株特征。F基因的序列测定表明,分离株之间的核苷酸序列具有77.4%～98.0%的同源性,与疫苗株Lasota的同源性为87.0%～98.9%,与国内标准强毒株F48E9同源性为89.7%～98.9%。推导其氨基酸序列分析表明,8个分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112 R-R-Q-K-R-F117,具有NDV强毒株特征,与毒力测定结果相符,2个分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸组成为112 G-R-Q-G-R-L117,与弱毒株特征相符。F基因分型和同源性比较显示:目前河北新城疫的流行以基因Ⅶ型为主(占70%),同时兼有基因Ⅱ型(占20%)和基因Ⅸ型(占10%)。
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番茄黄化曲叶病毒山东泰安分离物的全基因组克隆与分析
《山东农业科学 》 2012
摘要：2011年春季在山东泰安保护地采集疑似番茄黄化曲叶病毒病症状的样品(SDTA),利用双生病毒的通用引物及DNA-A基因的全长引物对样品进行扩增并测序,得到共2 781 bp的核苷酸序列。序列比对发现,该样品与番茄黄化曲叶病毒安徽分离物(FN650807)同源性最高为99.6%,系统进化树表明,该样品是番茄黄化曲叶病毒,属于番茄黄化曲叶病毒以色列株系。
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产蛋下降鸭群强毒新城疫病毒的分离鉴定与分子特征
《中国兽医杂志 》 2012 北大核心
摘要：从产蛋下降鸭群分离到两株新城疫病毒(NDV)(命名为Duck/China/SD6/2008和Duck/China/SD7/2009),经蚀斑纯化后测定其鸡胚平均死亡时间为77.6h,F蛋白裂解位点氨基酸序列为112-RRQKRF-117,符合强毒NDV的特征。根据F基因(374bp)对2个NDV分离株和30个NDV参考株进行基因分型结果表明,2个分离株均属于基因Ⅶ型。F基因和HN基因核苷酸序列同源性比较显示,2个鸭分离株与基因Ⅶ型NDV分离株同源性为94.1%～99.7%和94.4%～97.1%,与同期分离的鸡源NDV强毒株Chicken/China/SD4/2008同源性最高,分别为99.3%～99.5%和99.5%～99.7%,表明这两个鸭NDV毒株可能来源于感染NDV的鸡群。
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