科研产出
鸡湿热泄泻病证模型的建立
《中兽医医药杂志 》 2024
摘要：中兽医病证模型是评价药效及研究中兽药作用机制的有效工具。为了建立鸡湿热泄泻病证模型，本研究以SPF雏鸡为试验动物，分别选取大肠杆菌CVCC1558标准株和09-29分离株，采用胸部肌内注射、口腔灌服、泄殖腔灌注3种不同方式，选择不同感染剂量，进行大肠杆菌人工感染试验，观察各组鸡临床症状，进行体温、病理剖检、十二指肠黏膜组织病理学、血细胞计数等多项检查。结果显示，采用不同的感染方法，试验鸡表现出不同的临床表现和病理变化。与空白对照组相比，口腔灌服09-29菌株试验组无任何症状出现，其他各组鸡群均表现出不同程度的病症，其中口腔灌服或泄殖腔灌注大肠杆菌CVCC1558菌株2个组试验鸡表现为排黄绿色稀粪，体温升高，剖检表现为典型卡他性或出血性肠炎变化，无心包炎、肝周炎、气囊炎病变，白细胞数增多，十二指肠黏膜肠绒毛上皮细胞脱落，无病鸡死亡，从病因、症状、病机等方面进行辨证分析，完全符合中兽医湿热泄泻的特征。采用肌内注射感染方式的3个组试验鸡虽然也出现排黄色稀粪、肠炎等湿热泄泻的表现，但发病鸡更多表现为精神极度沉郁以及心包炎、肝周炎、气囊炎等全身败血症变化，死亡率高，全身症状明显，已表现为热入营血，并不符合单纯的湿热泄泻特征。试验表明，采用SPF雏鸡每只口腔灌服大肠杆菌CVCC1558菌株3 mL，或泄殖腔灌注大肠杆菌CVCC1558菌株3 mL，均可成功构建出鸡的湿热泄泻病证模型。该方法建立的病证模型完全符合中兽医湿热泄泻证的病因、病位、病机和证候特点，临床症状明显，剖检特征典型，病程时间长，模型稳定，重复性好，适用于鸡湿热泄泻证的中兽医防治研究。
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3种鸡源乳酸菌抑制大肠杆菌生物被膜形成的比较研究
《山东农业科学 》 2024
摘要：试验旨在研究鼠李糖乳杆菌、戊糖片球菌和口乳杆菌3种鸡源乳酸菌对大肠杆菌生物被膜生成的影响。利用置片法对供试菌株培养48 h,定性观察细菌生长与生物被膜的形成；利用96孔微板法定量检测4种细菌生长的OD590值，评价抑制生物被膜生成的效果。结果表明，大肠杆菌培养12 h开始形成生物被膜，24 h形成典型的生物被膜，并伴有交织链接的生物被膜骨架；3种乳酸菌培养36 h均未见生物被膜骨架，OD590值显示鼠李糖乳杆菌生物被膜厚度优于戊糖片球菌、口乳杆菌。与大肠杆菌共培养发现，3种乳酸菌全菌液和上清液均能显著抑制大肠杆菌生物被膜的生成，抑制效果鼠李糖乳杆菌>口乳杆菌>戊糖片球菌。结果可为探索乳酸菌拮抗大肠杆菌感染机制提供参考。
关键词： 鼠李糖乳杆菌 戊糖片球菌 口乳杆菌 大肠杆菌 生物被膜形成
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2022年青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌流行情况
《中国兽医杂志 》 2024 北大核心
摘要：为了分析青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征,并为多黏菌素的临床应用提供参考依据,本试验于山东省青岛市屠宰场采集鸡源和鸭源粪便样本,通过多黏菌素培养基分离大肠杆菌;分别采用琼脂稀释法、PCR、接合试验和全基因组测序,分析菌株的药物敏感性、耐药基因和毒力因子流行特征、系统发育群、mcr-1 基因可转移性和遗传环境.结果显示,本试验从133 份粪便样本中共分离获得26 株多黏菌素耐药大肠杆菌,总分离率为19.55%(26/133),其中鸭源菌株分离率(24.24%,16/66)高于鸡源菌株(14.93%,10/67).药物敏感性分析结果显示,所有菌株对替加环素和美罗培南全部敏感,对其余测试药物耐药率较高(42.31%~100%),所有分离菌株均存在多重耐药现象,鸡源菌株多重耐药较为分散,而鸭源菌株多重耐药集中于6 和9 重.26 株分离菌株均携带黏菌素耐药基因mcr-1;其余耐药基因携带率介于7.69%~96.15%,tet(B)基因仅在鸡源菌株中携带(20.00%),qnrS基因在鸡源菌株中携带率(30.00%)显著低于鸭源(100%).毒力因子检测发现,tarT、aer、pap 和 neuC 基因在鸡源菌株中的携带率(90.00%、70.00%、50.00%和 30.00%)高于鸭源(62.50%、12.50%、0%和0%).系统发育群结果显示,青岛地区多黏菌素耐药大肠杆菌的主要系统发育群为A组,占比为76.92%.接合试验证实了部分mcr-1 具有可转移性.mcr-1 遗传环境结果显示,mcr-1 上、下游并未发现插入序列.结果表明,mcr-1 仍旧是导致禽源多黏菌素耐药大肠杆菌流行的主要"元凶",但鸡源和鸭源多黏菌素耐药菌株在耐药性、耐药基因和毒力因子检出率等方面表现出一定差异性.因此,mcr-1 在食品动物源细菌中的流行研究和监控仍旧不可忽视.
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扶正解毒颗粒对鸡安全性和影响大肠杆菌抗药性的研究
《家禽科学 》 2022
摘要：将1日龄健康雏鸡80只,随机分为四组,每组20只.其中1~3组为试验组,分别在饮水中全程添加推荐剂量1倍(4 g/L)、3倍(12 g/L)和5倍(20 g/L)的扶正解毒颗粒;4组为不用药对照组.试验期8周,每天观察并记录各组鸡的临床体征,每周末称重1次,8周末试验结束时心脏采血测定各组鸡的血液生理生化指标,剖检鸡只,通过组织切片观察各脏器有无变化.从试验组2(即3倍推荐用药剂量组)和不用药对照组鸡只肠道中采集内容物分离大肠杆菌,进行抗药性分析.结果显示,各组试验鸡的行为、采食、粪便性状与空白对照组相比,均未见异常变化.1倍剂量组和3倍剂量组试验鸡的体重均显著高于不用药对照组(P<0.05或P<0.01)和5倍剂量组(P<0.05或P<0.01);而1倍剂量组和3倍剂量组间在各日龄段均无显著差异(P>0.05).试验各组和不用药对照组鸡只血液生理生化指标红细胞数、血红蛋白、白细胞数、淋巴细胞比例均无显著性差异(P>0.05).试验各组脏器颜色、形状、大小、位置等均未见异常变化.显微镜观察组织切片,细胞符合正常组织形态和结构特点.大肠杆菌对8种药物的MIC值均未有显著差异(P>0.05).以上结果表明,扶正解毒颗粒对靶动物鸡无明显不良影响,对大肠杆菌抗药性水平影响不显著.
关键词： 扶正解毒颗粒 鸡 血液 生理指标 大肠杆菌 抗药性
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山东省动物源多重高抗大肠杆菌的抗药基因和毒力基因分析
《家禽科学 》 2022
摘要：为了解和掌握山东省动物源大肠杆菌的多重抗药现象,并分析多重高抗菌株中抗药基因和毒力基因的分布和共存情况,从山东省兽医抗药性监测网(Veterinary antibiotic monitoring resistance system,Varms)菌种库中选取动物源大肠杆菌,用琼脂稀释法进行10种抗菌药物的药敏试验,对5重以上的多重抗药性菌株进行抗药谱分析,并选择多重高抗菌株进行MLST分型,采用PCR方法对常见的21种抗药基因和15种毒力基因进行分析.结果显示,5重以上抗药菌株占20%左右,9~10重抗药且最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)远远高于R值的多重高抗菌株32株中,均检测到含有7~13个抗药基因和0~6个毒力基因共存,其中高检出率的β-内酰胺类、喹诺酮类和氯霉素类的抗药基因均为质粒介导;毒力基因以fimC、sitA、iucD和hlyF为主要毒力因子,检出率为40%~90%.兼具抗药性和毒力的菌株造成严重的公共卫生威胁和巨大的食品安全潜在危害.
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禽类三种常见病原菌快速检测体系的建立及应用
《山东农业科学 》 2021
摘要：鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌是禽类3种常见的革兰氏阴性致病菌。为实现3种病原菌的快速检测,选择各自的保守基因ompA、phoA和fimW,建立并优化了同时鉴定3种病原菌的多重PCR方法。3个引物对的最佳终浓度分别为0.60、0.28、0.20μmol/L,最佳退火温度为57℃;该方法能从其他7种临床常见病原菌中特异性区分出鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌和沙门氏菌;在DNA水平和菌水平的最低检测限分别达到1 pg/μL和104 cfu/mL。本试验建立的多重PCR方法特异性和敏感性好,检测成本低、效率高,适用于禽类常见3种临床重要病原菌单一或混合感染的快速诊断及流行病学调查。
关键词： 鸭疫里默氏杆菌 大肠杆菌 沙门氏菌 多重PCR 快速检测
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山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
《中国畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品,采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定,用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性,采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示,从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌;大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%,多重耐药率为15.5%,其中对多黏菌素耐药率为52.2%,对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%,而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示,β-内酰胺类耐药基因中blaTEM基因携带率为100%,其中全部为blaTEM-1基因,blaCTX-M基因携带率为32.4%,其中主要为blaCTX-M-15基因,没有检测到blaSHV、blaOXA基因;多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%;喹诺酮类耐药基因中aac（6’）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%,qnrB基因携带率为20.8%,没有检测到qnrA和qnrC耐药基因;对8种毒力基因检测分析结果显示,仅Hly毒力基因没有被检出,Ecs3703、Irp2基因的检出率较高,分别为90.1%和63.4%,71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子,检出率为15.5%,11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构,最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明,山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重,携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌,Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用,可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。
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山东省肉鸡养殖场大肠杆菌的分离鉴定及抗药性监测
《山东农业科学 》 2021
摘要：近年来,由于抗菌药物广泛应用于动物和人类疾病的治疗和预防,导致各种细菌对抗生素的抗性急剧增加,尤其是大肠杆菌的多重耐药性。为了解山东省肉鸡养殖场大肠杆菌的抗药性情况,本研究于2018—2019年从山东省3个规模化养鸡场采集123份新鲜粪便样品,对其进行大肠杆菌的分离和鉴定,并利用微量肉汤稀释法对大肠杆菌分离株进行药敏试验。结果显示,从123份新鲜粪便样品中共分离到123株大肠杆菌;全部分离株对多西环素耐药,对美罗培南敏感。大肠杆菌多重耐药率为99.2%,对9种抗生素耐药的菌株多达34株。本研究结果可为养鸡场中抗生素的规范使用提供理论依据。
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一例由疫苗接种引起的商品肉鸡多病原混合感染
《家禽科学 》 2021
摘要：为确诊山东某商品肉鸡群发病的原因,采集病死鸡的喉头、气管等组织,分别进行核酸和病原分离鉴定。结果显示,传染性喉气管炎病毒（ILTV）、传染性支气管炎病毒（IBV）和禽腺病毒4型（FAd V-4）等特异性PCR均呈阳性,而新城疫病毒（NDV）、低致病性禽流感H9N2等均为阴性。测序结果表明,ILTV分离株（PY）与疫苗株（K317）ICP4基因的核苷酸同源性为100%;而IBV分离株（PY）与疫苗株H120、4/91 N基因的同源性分别为86.4%、86.6%,显示出较大的差异。CAM途径接种鸡胚分离出腺病毒,且对SPF鸡胚具有一定的致病性。同时,从病鸡肝脏中分离到大肠杆菌,药敏试验证实对多粘菌素B、健牧茶多酚、阿莫西林棒酸、头孢噻肟敏感,采用敏感药物治疗后取得一定的临床治疗效果。综上所述,该病是一起由疫苗接种应激而引起的多病原混合感染。
关键词： 传染性喉气管炎病毒 禽腺病毒4型 传染性支气管炎病毒 大肠杆菌 混合感染
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常见消毒剂消毒效果评价
《家禽科学 》 2020
摘要：为评价规模化养殖场常用消毒剂的消毒效果,用规模化养殖场分离鉴定的三株细菌(大肠杆菌、沙门氏菌和葡萄球菌)作为标准菌株,用菌悬混合液定量杀菌法分别对13种消毒剂的杀菌效果进行比较.在相同实验室条件下,将大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌分别与消毒剂按不同稀释比例混匀后作用15 min,培养并计数杀菌后的菌落总数.结果显示:A、B、I比例为1∶2000;C、D比例为1∶1000;H比例为1∶800;G比例为1∶600;E、F、L、M浓度为0.3%(其中L和M以碘含量计);J浓度为0.05%;K浓度为0.02%;以上浓度均可达到100%杀菌效果.
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