科研产出
棋盘试验优化噬菌体与大肠埃希菌的最佳感染复数
《中国抗生素杂志 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：目的利用棋盘法测定噬菌体与大肠埃希菌在不同浓度比条件下的杀菌作用,优化传统的最佳感染复数试验。方法先利用96孔培养板纵向10倍梯度稀释噬菌体,再利用新的96孔板横向10倍梯度稀释大肠埃希菌,最后用排枪分别从稀释好的噬菌体孔板和稀释好的菌液孔板中吸取100μL混合液转移到同一个新孔板中混合培养。用96点阵检测板沾取过夜培养的混合液分别接种于LB固体琼脂检测板与LB宿主菌半固体琼脂检测板上,37℃培养14h。结果受噬菌体密度和宿主菌的数量的限制,多重性感染(multiplicity of infection,MOI)基本上在109~1010PFU/m L范围内波动,这种差异并没有本质的区别。棋盘试验3种方法都一致显示大肠埃希菌浓度低于106CFU/m L,噬菌体效价高于104PFU/m L时,呈现稳定的杀菌效果;固体检测板结果显示在呈现稳定的杀菌效果的区域内外,也有不同生长程度的菌落;半固体检测板均出现噬菌斑,表明两者作用结束后都有噬菌体存留,并生长成为充分的噬菌斑,但MOI测定时效价在一个数量级内有差异。结论 MOI试验着眼于噬菌体裂解固定数量的宿主菌的能力,棋盘试验则是着眼于对宿主菌的裂解杀灭活性;利用96孔液体培养板棋盘法可以很好的确定噬菌体与大肠埃希菌作用有效范围和最低噬菌体使用浓度,可以为杀灭不同浓度宿主大肠埃希菌提供噬菌体效价参考。一般情况下细菌的浓度最高达到109~1010CFU/m L,考虑到实际细菌的感染量不会太高的情况,采用105PFU/m L噬菌体能起到可靠的杀菌作用。
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山东省鸡源致病性大肠杆菌O-抗原混合血清型分析
《中国兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：采用抗原抗体凝集反应,用常见的18种O因子血清测定从临床上分离鉴定的182株大肠杆菌的O抗原血清型。结果显示,山东地区鸡源大肠杆菌的优势血清型为O24,O15,O2,O127,O1,O18,O78,占检测菌株的41.21%,同时出现大量混合血清型,占检测菌株的24.18%。这是国内首次报道检测到大量的大肠杆菌O因子混合血清型,印证了国外研究人员对O-AGC核苷酸序列研究的结果,有助于最终对O抗原血清型进行更加准确的分类以及大肠杆菌疫苗的研制。
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动物源大肠杆菌抗药性检测及多抗高抗菌株ERIC图谱分析
《山东农业科学 》 2017
摘要：为检测山东2016年动物源大肠杆菌的抗药情况,并分析多抗高抗菌株间基因重复一致序列PCR(ERIC-PCR)基因图谱,探讨多抗高抗大肠杆菌ERIC-PCR基因分型与抗药性之间的关系,从患病动物中分离并鉴定猪源和禽源大肠杆菌110株,用琼脂稀释法测定其对10种抗生素的抗药情况,并从中挑选20株多抗高抗大肠杆菌进行ERIC-PCR,根据DNA指纹图谱进行聚类遗传分析。结果表明,猪源大肠杆菌对多类抗生素具有抗药性,对氟苯尼考、多西环素和氨苄西林的抗药率达100%,对头孢噻肟抗药率较低,为57.14%;禽源大肠杆菌也具有高度抗药性,对氟苯尼考抗药率达95.51%,对环丙沙星抗药率最低,为61.80%。ERIC分析显示,多抗高抗菌株谱型分散,为多克隆来源,其基因分型B型与抗药特性之间呈一定相关性。表明,动物源大肠杆菌抗药程度高,且呈现高度多重抗药性,对不同种类抗生素及同类抗生素不同药物之间均存在严重的抗药性。多抗高抗大肠杆菌无明显种属特性,其传播和蔓延对畜牧业发展和公共卫生安全都形成潜在的巨大风险。
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山东省鸡源性大肠杆菌耐药变化趋势监测
《中国兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在了解山东省鸡大肠杆菌耐药变化趋势,以期指导临床用药。采用96点阵药敏检测法,测定从临床上分离鉴定的2008-2014年山东省不同地区鸡场的210株大肠杆菌对14种抗生素的耐药性。结果显示,鸡源大肠杆菌对14种抗生素中的13种(多西霉素除外)的耐药性在这7年间有所增长,其中对10种抗生素的耐受性在7年间近乎翻了1倍甚至更高。根据监测结果,建议在山东地区暂停使用头孢噻呋治疗鸡大肠杆菌病,推荐使用多西霉素、大观霉素、硫酸粘菌素,将庆大霉素、新霉素、环丙沙星、恩诺沙星、氟苯尼考作为次级药物使用,并适当加大用量,应谨慎使用喹诺酮类药物和氟苯尼考。
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利用环介导等温扩增技术快速检测饮用水中的大肠杆菌
《山东农业科学 》 2017
摘要：本研究以饮用水为研究对象,利用大肠杆菌mal B保守基因设计LAMP特异引物,通过优化反应条件,建立了适用于快速检测饮用水中大肠杆菌的LAMP方法,可在60℃条件下反应60 min完成检测,检测灵敏度达到1.35 CFU/m L。利用SYBR GreenⅠ染料剂可在紫外灯下直接观察检测结果。通过检测掺入已知大肠杆菌的纯净水样品,结果表明,本研究所建立的LAMP方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便的特点,可用于饮用水中大肠杆菌致病菌的快速检测,对预防和控制大肠杆菌的传染具有重要意义。
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噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析及对鸡大肠杆菌的疗效
《畜牧兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了解决目前严重的抗生素耐药性,寻找抗生素的替代品,作者探究了大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的基本生物学特性及其对致病性大肠杆菌1019的治疗效果。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析显示其效价可达到10~9pfu·mL~(-1),透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。热稳定性较好,在60℃保温1h后噬菌体效价仍可达到10~7pfu·mL~(-1)以上。对pH值的适应范围较宽,在pH4~10内仍能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适pH在7.0左右。最佳感染复数(MOI)为0.1,感染宿主菌的潜伏期20min,爆发期70min。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3对大肠杆菌1019有较强的裂解能力,可使SPF鸡肠道内大肠杆菌1019的数量降低96.5%。该大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3在治疗特定的大肠杆菌感染中具有较大的应用潜能。
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银翘口服液安全性和临床药效研究
《中兽医医药杂志 》 2016
摘要：目的:验证银翘散改为银翘口服液后的安全性和有效性。方法:Wistar大鼠灌胃银翘口服液,在10-40 g/kg剂量范围内,经口给予银翘口服液30 d后,检查Wistar大鼠的一般生理状态及血液生理、生化指标,并进行病理解剖及病理组织学检查;在大肠杆菌人工感染发病鸡和大肠杆菌病自然发病鸡群中进行银翘口服液和银翘散对鸡大肠杆菌的疗效对比。结果:银翘口服液各剂量组所有检测指标与阴性对照组无显著性差异(P>0.05),且对Wistar大鼠的生长发育未产生不良影响,长期重复应用无亚急性毒性,疗效试验结果显示,银翘口服液组总体预防和治疗效果优于银翘散。结论:将银翘散改为银翘口服液有较好应用前景。
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微量肉汤稀释法药敏试验的误差分析
《中国抗生素杂志 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：药敏试验是抗菌药理学的重要内容,也是临床施药的重要依据。在严格参照CLSI药敏试验标准的情况下,测定的最低抑菌浓度(MIC)结果依然波动。本文分析了微量肉汤稀释法存在的试验误差和差异,包括同一个菌落的重复试验、同一菌株的不同菌落测定值、同一只鸡肠道分离的不同菌株测定值、以及试验操作人员测定值、同一鸡舍不同鸡测定值。结果表明,前3项因素差异不显著,整体试验存在1~2个梯度的误差,主要是由于菌株群体MIC的离散性、倍比设置的抗生素梯度的离散性,以及肉眼观察浊度的主观误差造成。值得注意的是,同一鸡舍不同鸡个体差异可能较大,在条件允许的情况下,尽可能多采集几只鸡样品,以MIC频率分布表征菌群整体的抗药性水平。
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