科研产出
发酵床养殖对仔猪胃肠道大肠杆菌和乳酸菌增殖的影响
《华中农业大学学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为阐明发酵床养殖对断奶仔猪消化道菌群的影响,对发酵床和水泥地养殖仔猪消化道大肠杆菌和乳酸菌的动态变化进行比较分析。试验期为42d。15头30日龄断奶仔猪分别在试验开始第1天(断奶当天)、第21天和第42天进行扑杀,每次每组扑杀3头,取胃、回肠、盲肠、结肠粘膜层及各段内容物进行2类细菌的分离计数,同时检测相同时间点发酵床表层与深层垫料中的细菌数量。结果发现:随着养殖时间的延长(1～42d),消化道大肠杆菌呈下降趋势,如发酵床仔猪结肠段大肠杆菌由开始的6.4×107降低到2.2×105,而乳酸菌先下降后上升,如发酵床仔猪回肠段内容物乳酸菌数量由4.6×109降到2.6×108后再增加到1.4×1010。发酵床养殖未改变仔猪胃肠道细菌变化规律,同时发酵床垫料中的乳酸菌数量不影响断奶仔猪消化道内的乳酸菌数量;此外,随着发酵床使用时间延长,发酵床垫料中致病菌的数量和种类增加,发酵床垫料底层大肠杆菌在试验开始未检测到,在试验42d时增加到6.1×107。
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大肠埃希菌过表达lexA基因对恩诺沙星杀菌力和抗药性突变的影响
《中国抗生素杂志 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：目的构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台。方法构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG诱导BL21-lexA过表达lexA,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定LexA蛋白,用荧光定量PCR测定SOS应答基因recA和umuC表达变化;然后用恩诺沙星梯度平板测定恩诺沙星对BL21-unmodified(空质粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗药性突变率。结果重组质粒菌株BL21-lexA在IPTG诱导下过表达LexA,抑制recA和umuC表达,提高了大肠埃希菌对恩诺沙星的敏感性,降低了抗药性突变率。结论通过IPTG诱导BL21-lexA过表达LexA蛋白,能构建稳定的SOS应答抑制模型,用于筛选SOS抑制剂,提高恩诺沙星杀菌力和降低抗药性突变。
关键词： lexA SOS应答 大肠埃希菌 恩诺沙星 抗药性突变 质粒过表达
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利用重建祖先基因方法研究连续诱导培养大肠杆菌对恩诺沙星抗药性突变的规律
《山东大学学报(医学版) 》 2012 北大核心
摘要：目的研究大肠杆菌对氟喹诺酮抗药性突变的规律及基因型与表型的对应关系。方法以质控菌株Escherichia coli ATCC 25922为初始菌株,恩诺沙星浓度由0.031 25μg/mL增加到128μg/mL,分步诱导得到13株稳定的抗药性菌株,检测氟喹诺酮靶酶基因gyrA、gyrB和parC、parE的序列及其突变位点,检测恩诺沙星的最低抑菌浓度(MIC)及抑制外排泵后MIC,分析抗药性表型与基因型、蛋白结构、外排泵及生化特性的关系。结果低浓度氟喹诺酮可诱导GyrA的Ser83-Leu和ParC的Glu84-Lys单一位点突变,致低水平抗药性,而Ser83-Leu逐步与Asp87-Gly、Glu84-Lys组合,导致氟喹诺酮突变决定区突变位点氨基酸的极性、空间位阻变化,影响靶蛋白与DNA和恩诺沙星的结合,可致高水平抗药性。外排泵与基因突变共同作用,使细菌耐受逐步升高药物浓度,M IC基本平行高出培养浓度1倍。结论增加恩诺沙星的使用剂量,能诱导高抗菌株产生,恩诺沙星抗药性表型与基因型具有对应关系和规律性变化。
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“二氧化氯泡腾片”对家禽主要病原微生物杀灭效果试验
《家禽科学 》 2012
摘要：为了观察"二氧化氯泡腾片"对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、禽流感H9亚型病毒及鸡新城疫病毒的杀菌及杀病毒效果,采用悬液定量杀菌试验和通过固定病毒稀释消毒液法进行实验室观察。结果:二氧化氯5mg/L作用5min即可对大肠杆菌临床分离株产生100%的杀菌效果。二氧化氯5mg/L作用10min或二氧化氯10mg/L作用5min均能对金黄色葡萄球菌临床分离株产生100%的杀菌效果。2mg/L二氧化氯就能对103EID50新城疫病毒有100%的杀灭作用,而1mg/L不能全部杀灭新城疫病毒。禽流感病毒H9亚型对二氧化氯比新城疫病毒敏感,1mg/L二氧化氯即可对103EID50禽流感病毒H9有较好的杀灭作用。结论:"二氧化氯泡腾片"是一种方便、高效的消毒剂,在较低的浓度条件下,就能对家禽主要病原微生物有杀灭效果。
关键词： 二氧化氯泡腾片 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 鸡新城疫病毒 H9禽流感亚型病毒 杀灭效果
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家禽大肠杆菌分型方法研究进展
《家畜生态学报 》 2011
摘要：大肠杆菌感染是家禽在集约化养殖下经常爆发并迅速传播的一种疾病。该病能引起家禽局部或全身性感染,给广大养殖户带来巨大的经济损失。大肠杆菌既是家禽体内的正常菌群又是致病菌,不同类型的大肠杆菌其致病力不同。论文回顾了大肠杆菌目前常用的分型方法,包括常规的血清学分型,生化分型、药敏实验分型以及近年来随着生物学发展新兴的质粒图谱分型和脉冲场分型等,并就大肠杆菌现有的分型方法做一简要阐述,希望能为更好地研究和预防该病的发生,为确定不同菌株之间的关联性、细菌传染源的追踪和寻找传播途径提供更好、更合适的方法做参考。
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用线性梯度平板准确测定药物敏感性和分离抗药性菌株
《中国科学:生命科学 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：菌群在药物的最低抑菌浓度附近的动力学过程是抗生素药理学研究的核心问题.建立一种能确定精确的MIC且又能准确分离抗药性菌株的方法,是目前临床对药敏实验新的要求.根据Fick扩散定律制备了线性梯度平板:将15mL含适当浓度恩诺沙星的琼脂培养基在9cm培养皿中倾斜凝固,刚好覆盖整个平板底面,然后水平放置,再在其上层加入同样体积的无药琼脂培养基,凝固12h后,药物浓度达到扩散平衡而呈均匀连续线性梯度.通过实测验证药物浓度在平板表面呈线性梯度分布.将待检E.coli菌群均匀涂布在梯度平板上,培养12h后,随恩诺沙星浓度提高依次形成连续密集小菌落区和离散大菌落区,根据两区域的分界线可以确定菌群自然形成的真实的MIC,与常规药敏实验方法测定结果一致.大菌落重新涂布高梯度平板,分界线显著上升,并检测出抗药性基因突变,表明该方法很容易筛选出菌群中的抗药性菌株.梯度平板可以方便地呈现整个菌群在MIC附近的动力学过程和遗传生理变化,并预警该抗生素使用后可能出现的抗药性,从而指导临床抗菌药物的选择和使用.
关键词： 线性梯度平板 E.coli 恩诺沙星 MIC 抗性菌
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奶牛乳腺炎源性大肠杆菌csgC基因的克隆及载体构建
《中国兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank上发表的curli菌毛csgC基因序列设计了1对特异性引物。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离出致病性大肠杆菌,经生物学鉴定后,提取全基因组DNA为模板,PCR扩增出csgC基因,连入pMD18-T克隆载体,测序,结果表明,扩增片段含有333个核苷酸,编码111个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的大肠杆菌W3110的全基因组DNA中的csgC基因序列最相近,氨基酸序列同源性为99.7%。该基因与原核表达载体pET32a+相连,转入BL21(DE3)感受态细胞。挑选阳性菌落经PCR鉴定和酶切鉴定后表明成功构建原核表达载体pET32a+/csgC。
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恩诺沙星对大肠杆菌全基因组表达谱的影响
《畜牧兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为探索恩诺沙星(Enrofloxacin)压力下大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)生理状态的变化,从而为进一步研究细菌对药物压力的应答机制提供参考,作者将E.coli接种于加入恩诺沙星(浓度为1/2 MIC)的液体LB中,绘制生长曲线,分别以光镜和电镜进行形态学观察,取5 h培养菌,进行表达谱差异分析。结果显示,加入恩诺沙星后细菌生长速度明显降低(P<0.01),菌体形态呈长丝状,基因芯片检测发现519个差异点,其中239个上调,而280个下调,表达变化3倍以上的基因66个,其中34个上调,32个下调,主要涉及SOS应答、细胞分裂、压力应答、物质合成、新陈代谢、转录调控等生物学功能。上述结果表明,在恩诺沙星压力下,细菌启动SOS应答,细胞分裂被抑制,细菌生理机制发生了复杂的变化。
关键词： 恩诺沙星 表达谱基因芯片 大肠杆菌 细菌形态 转录分析
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大通量的抗生素药敏检测盒的设计及应用
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：基于琼脂稀释法,设计制作了96点阵抗生素药敏检测盒。以NCCLS(2007)抗生素最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)微量稀释法为对照,测定了分离自规模化猪场饲养员和幼儿园、中学学生的98株大肠杆菌对恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星和中药三黄汤的药物敏感性。结果表明,两种方法测定的最低杀菌浓度(minimal bactericidal concentration,MBC)、MIC都表现高度对称,其差值的平均值都在一倍稀释度内,在差值0.5μg/mL范围内都达到90%以上的符合。MBC与MIC高度相关,r=0.94～0.99。这些指标说明两种方法测定的MBC与MIC平行性好。以总体的抗生素敏感性频率比较,两种方法测定值也很相近,符合率为93.93%。本检测盒还可以准确测定中药三黄汤对大肠杆菌的MIC(125～500mg/mL)。96点阵抗生素药敏检测盒是适合于实验室进行大规模抗药性监测的新工具,具有简易、准确、快速、大通量、节约的优点。配合96孔培养板,一次可以测定96株病原菌对一种抗生素或中药的敏感性。
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山东地区鸡源性大肠杆菌的耐药性与质粒图谱的监测分析
《家禽科学 》 2009
摘要：对来源于山东各地自然发病鸡群的19株鸡源致病性大肠杆菌进行了耐药性和质粒图谱检测,并对菌株耐药性与质粒图谱间关系进行了分析研究。结果表明:19株鸡源致病性大肠杆菌均具有多重耐药性,耐药图谱复杂;除3株菌没有提取到质粒外,其余菌株均提取到质粒条带1～5条;对比分析发现,菌株耐药性与所携带质粒的数量和大小并无直接的相关性。
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