文献类型： 中文期刊

作者： 牛卫卫 ¹ ; 白华 ² ; 王进文 ³ ; 颜世敢 ³ ; 齐静 ³ ; 骆延波 ³ ; 李璐璐 ³ ; 贾纪美 ¹ ; 李靖冉 ¹ ;

作者机构： 1.山东省预防兽医学重点实验室

2.山东省畜牧兽医局

3.山东省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： lexA;SOS应答;大肠埃希菌;恩诺沙星;抗药性突变;质粒过表达

期刊名称： 中国抗生素杂志

ISSN： 1001-8689

年卷期： 2013 年 38 卷 12 期

页码： 942-946

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台。方法构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG诱导BL21-lexA过表达lexA,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定LexA蛋白,用荧光定量PCR测定SOS应答基因recA和umuC表达变化;然后用恩诺沙星梯度平板测定恩诺沙星对BL21-unmodified(空质粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗药性突变率。结果重组质粒菌株BL21-lexA在IPTG诱导下过表达LexA,抑制recA和umuC表达,提高了大肠埃希菌对恩诺沙星的敏感性,降低了抗药性突变率。结论通过IPTG诱导BL21-lexA过表达LexA蛋白,能构建稳定的SOS应答抑制模型,用于筛选SOS抑制剂,提高恩诺沙星杀菌力和降低抗药性突变。